Characterization of ENTH domain proteins and their interaction with SNAREs in S.cerevisiae
Characterisierung vom proteinen mit ENTH domänen und ihre Interaktion mit SNARE proteinen in S.cerevisiae
von Subbulakshmi Chidambaram
Datum der mündl. Prüfung:2005-06-28
Erschienen:2005-07-29
Betreuer:Prof. Dr. Gabriele Fischer von Mollard
Gutachter:Prof. Dr. Dr. h.c. Kurt von Figura
Gutachter:PD Dr. Stefan Irniger
Gutachter:Prof. Dr. Rüdiger Hardeland
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Name:chidambaram.pdf
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Format:PDF
Description:Dissertation
Zusammenfassung
Englisch
SNAREs play an important role in the membrane fusion events as fusogenic proteins. Therefore, localization and activity of SNAREs has to be tightly controlled. Regulatory proteins bind to N-terminal domains of some SNAREs. Vti1b is a mammalian SNARE which functions in late endosomal fusion. To investigate the role of the N-terminus of vti1b we performed a yeast two-hybrid screen. The N-terminus of vti1b interacted specifically with the ENTH domain of enthoprotin/CLINT/epsinR. The interaction was confirmed using in vitro binding assays. This complex formation between a SNARE and an ENTH domain was conserved between mammals and yeast. Yeast Vti1p interacted with the ENTH domain of Ent3p. ENTH proteins are involved in the formation of clathrin coated vesicles. Both, epsinR and Ent3p bind adaptor proteins at the TGN. Vti1p is required for multiple transport steps in the endosomal system. Genetic interactions between VTI1 and ENT3 were investigated. Synthetic defects suggested that Vti1p and Ent3p cooperate in transport from the TGN to the prevacuolar endosome. In addition, VTI1 interacts genetically with ENT5. Ent3p and Ent5p have partially redundant functions. Further analysis showed that Ent3p interacts with N-terminus of other SNAREs also.
Keywords: ENTH domain; SNAREs; Vti1p; Ent3p; Ent5p.
Weitere Sprachen
SNAREs spielen eine wichtige Rolle bei der
Membranfusion als fusiogene Proteine. Folglich muß die
Lokalisation und Funktion von SNAREs streng gesteuert
werden. Regulatorische Proteine binden an N-terminale
Domänen einiger SNAREs. Vti1b ist ein Säugetier- SNARE,
das in späten endosomalen Fusionen eine Rolle spielt.
Um die Rolle des N-Terminus von vti1b zu
charakterisieren, wurde eine yeast two hybrid Analyse
durchgeführt. Der N-Terminus von vti1b wirkte
spezifisch auf die ENTH-Domänen von
Enthoprotin/CLINT/EpsinR ein. Diese Abhängigkeit wurde
durch in-vitro Bindungsstudien bestätigt. Die komplexe
Anordnung zwischen einem SNARE und einer ENTH-Domäne
ist zwischen Säugetieren und Hefe konserviert. Hefe
Vti1p wechsel auf die ENTH- Domäne von, Ent3p ein.
ENTH-Proteine sind an der Bildung der clathrin coated
vesicles beteiligt. Beide, EpsinR und Ent3p binden
Adapterproteine am TGN. Vti1p wird für mehrere
Transportschritte im endosomalen System benötigt.
Genetische Interaktionen zwischen VTI1 und ENT3 wurden untersucht. Künstliche
Defekte lassen vermuten, daß Vti1p und Ent3p beim
Transport vom TGN zum prevacuolären Endosom
kooperieren. Zusätzlich wirkt VTI1 genetisch auf ENT5 ein. Ent3p und Ent5p haben
teilweise reduntante Funktionen. Weitere Analysen
zeigten, daß Ent3p auch auf den N-Terminus anderer
SNAREs einwirkt.
Schlagwörter: ENTH domänen; SNAREs; Vti1p; Ent3p; Ent5p.