dc.contributor.advisor | Reichardt, Holger Prof. Dr. | de |
dc.contributor.author | Paasch, Christoph | de |
dc.date.accessioned | 2013-01-14T15:17:52Z | de |
dc.date.available | 2013-01-30T23:51:06Z | de |
dc.date.issued | 2012-05-15 | de |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-000D-EFB0-2 | de |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1521 | |
dc.description.abstract | Jährlich erkrankt in Deutschland eine
Vielzahl von Menschen an einer durch Aspergillus fumigatus
ausgelösten invasiven Schimmelpilzmykose. Fast ausschließlich
betroffen sind schwer immunsupprimierte Patienten. Die Infektion
mit A. fumigatus findet in der Regel über die Aufnahme von Sporen
in die Lunge statt. Während beim Menschen die angeborene Immunität
die entscheidende Rolle in der Abwehr des Pilzes spielt, stellt
sich in Mäusen nach überlebter invasiver Aspergillose eine
erworbene Immunität ein. In verschiedenen Studien konnte mit
Einzelantigenen von A. fumigatus im Tiermodell bereits eine
Immunität induziert werden. Mittels dieser Einzelantigene sowie der
Identifizierung weiterer Immunität induzierender Antigene könnte
die Basis für die spätere Entwicklung eines Impfstoffs gegenüber
dieser Erkrankung geschaffen werden. Eine wichtige Gruppe
erfolgversprechender Impfantigene sind Lipasen. So wurden für
andere Organismen Lipasen als Virulenz- und Immunitäts-vermittelnd
klassifiziert. In dieser Arbeit gelang es durch Sondenscreening
einer Lambda-Phagen-cDNA-Bank die für eine Lipase von A. fumigatus
kodierende cDNA zu extrahieren. Diese wurde anschließend gereinigt,
mit Restriktionsenzymen behandelt und in einen Plasmid kloniert. Es
erfolgte der Transfer in einen bakteriellen Expressionsstamm. Nach
ihrer Expression wurde diese Lipase affinitätschromatographisch
gereinigt. Die Sequenzanalyse erbrachte ein hypothetisches
Signalpeptid und eine Vielzahl konservierter Domänen. So konnten
das katalytische Zentrum, der Deckel (lid) sowie das nukleophile
Zentrum identifiziert werden. Diese konservierten Domänen verweisen
u.a. auf die Zugehörigkeit des klonierten Enzyms zu Lipasen, die
nach EC-Klassifikation in die Gruppe 3.1.1.3 eingeteilt werden. Die
vorliegende Arbeit soll als Grundlage dienen, im Hinblick auf die
Entwicklung eines Impfstoffs gegenüber A. fumigatus die
extrazelluläre Lipase im Tiermodell auf Induktion einer protektiven
Immunität zu untersuchen. Ebenso soll sie dazu beitragen
Lipase-knockout-Mutanten herzustellen. Diese sollten mit dem
Wildtyp verglichen werden, um auf eine mögliche Rolle der Lipase
während der Pathogenese rückschließen zu können. | de |
dc.format.mimetype | application/pdf | de |
dc.language.iso | ger | de |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/ | de |
dc.title | Klonierung und Expression einer extrazellulären Lipase von A. fumigatus | de |
dc.type | doctoralThesis | de |
dc.title.translated | Cloning and expression of an extracellular lipase from A. fumigatus | de |
dc.contributor.referee | Reichardt, Holger Prof. Dr. | de |
dc.date.examination | 2012-05-21 | de |
dc.subject.dnb | 610 Medizin, Gesundheit | de |
dc.subject.gok | MED 333 Medizinische Mykologie | de |
dc.description.abstracteng | In Germany every year a great number of
people contract invasive mould mycosis initiated by the fungus
Aspergillus fumigatus. Almost solely severe immunocompromised
patients are being affected.
The infection with A. fumigatus commonly takes place by absorbing
spores into the lung.
While humen gain immune defense against the fungus due to innate
immunity, mice develop acquired immunity by surviving an invasive
aspergillosis.
Several studies using an animal model showed that immunity can be
induced by using single antigens of A. fumigatus.
The use of these single antigens as well as the identification of
more immunity inducing antigens could form the basis for developing
a vaccine against the desease.
A promising group of vaccine antigens are lipases. In other
organisms lipases were classified as being virulence and immunity
mediating.
The work at hand shows the successful extraction of a for a lipase
encoding cDNA of A.fumigatus by screening a Lambda-Phage-cDNA
library with an hybridization probe. In addition this cDNA was
being purified, treated with restriction enzymes and cloned in a
plasmid. Then it was being transfered into a bacterial expression
strain. After the expression the lipase was being purified by
affinity chromatography. The analysis of the sequence supplied an
hypothetical signal peptide and numerous conserved domains. That
way it was possible to identify the catalytic center, the lid as
well as the nucleophilic center.
These conserved domains show - amongst other things – that the
cloned enzyme belongs to lipases, which according to the
EC-classification belong to the group 3.1.1.3. The work at hand
shall serve as a basis for the development of a vaccine against A.
fumigatus using an animal model helping to detect an extracellular
lipase induced protective immunity.
It shall contribute to the cultivation of lipase-knockout-mutants.
These mutants shall be compared to their wild type to conclude that
they may play a significant role in the pathogenesis. | de |
dc.contributor.coReferee | Kube, Dieter Prof. Dr. | de |
dc.contributor.thirdReferee | Doenecke, Detlef Prof. Dr. | de |
dc.subject.topic | Medicine | de |
dc.subject.ger | extrazelluläre Lipase | de |
dc.subject.ger | Aspergillus fumigatus | de |
dc.subject.ger | Mykosen | de |
dc.subject.ger | Impfantigene | de |
dc.subject.eng | extracellular lipase | de |
dc.subject.eng | Aspergillus fumigatus | de |
dc.subject.eng | vaccine | de |
dc.subject.eng | mould mycosis | de |
dc.subject.bk | 44.43 Medizinische Mikrobiologie | de |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-3508-1 | de |
dc.identifier.purl | webdoc-3508 | de |
dc.affiliation.institute | Medizinische Fakultät | de |
dc.identifier.ppn | 720543134 | de |