dc.contributor.advisor | Mayer, Frank Prof. Dr. | de |
dc.contributor.author | Demberg, Thorsten | de |
dc.date.accessioned | 2013-01-31T08:18:01Z | de |
dc.date.available | 2013-01-31T08:18:01Z | de |
dc.date.issued | 2003-11-25 | de |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-000D-F261-1 | de |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-3661 | |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-3661 | |
dc.description.abstract | In der vorliegenden Arbeit wurde die zuvor
nicht bekannte komplette cDNA-Sequenz des Ratten FH identifiziert.
Zusätzlich wurden zwei verkürzte rekombinante Varianten des Ratten
FH hergestellt. Eine bestand aus den ersten 7 SCR des FH und wurde
in HEK293- und Mono-Mac-6-Säugerzellen exprimiert, die andere
bestand aus den ersten 4 SCR des FH und wurde mit Hilfe des
Baculovirussystems in SF21-Insektenzellen exprimiert. Beide
rekombinanten Faktoren FH(SCR1-7) und FH(SCR1-4) zeigten eine
Komplement-inhibitorische Wirkung im CH50-Hämolysetest und konnten
damit als funktionell aktiv charakterisiert werden. Mit Hilfe des
in dieser Arbeit hergestellten monoklonalen anti-FH Antikörpers
(mAK 4-7D) konnte eine immunaffinitätschromatographische
Aufreinigung des FH aus Rattenserum etabliert werden, die den
Gesamt-FH(SCR1-20) im zweistelligen mg-Bereich für strukturelle und
funktionelle Untersuchungen zur Verfügung stellte. In Verbindung
mit dem ebenfalls neu generierten anti-FH IgG (polyklonaler
Antikörper des Kaninchens) wurde für die Detektion und
Quantifizierung des FH ein Sandwich-ELISA etabliert. Durch die
bereits im Rahmen der eigenen Diplomarbeit („Induktion und
Regulation des Komplementproteins Faktor I“) erfolgte Generierung
eines monoklonalen anti-Ratten FI Antikörpers und die innerhalb
dieser Arbeit zusätzlich erfolgte Herstellung eines polyklonalen
anti-Ratten FI IgG (ebenfalls aus dem Kaninchen) wurden weitere
Werkzeuge für die Detektion des FI im Immunblotverfahren
geschaffen. Durch die Immobilisierung des anti-Ratten FI mAK15F11-2
an einer Matrix war es zusätzlich möglich, den Ratten FI in
funktionell aktiver Form aus Serum zu isolieren. Die beiden mittels
Immunaffinitätschromatographie aus Serum isolierten Faktoren H und
I erwiesen sich wie auch die beiden rekombinanten FH-Varianten
(SCR1-4 und SCR1-7) im CH50-Hämolysetest als aktive Proteine, so
dass sie für weitere in vitro aber auch für geplante in vivo
Experimente zur Verfügung stehen. Zusammenfassend sei festgestellt,
dass mit dieser Arbeit eine breite Basis an Werkzeugen für die
Detektion, Quantifizierung und strukturelle Untersuchung der
Komplement-inhibitorischen Faktoren H und I der Ratte geschaffen
wurde. Darüberhinaus stehen beide Faktoren in zur Homogenität
aufgereinigter Form, der Faktor H zusätzlich in zwei rekombinanten
Varianten (SCR1-4 und SCR1-7) funktionell aktiv für einen
therapeutischen Einsatz in verschiedenen Krankheitsmodellen der
Ratte zur Verfügung. | de |
dc.format.mimetype | application/pdf | de |
dc.language.iso | ger | de |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/ | de |
dc.title | Analyse und Expression der Komplementproteine Faktor H und Faktor I der Ratte | de |
dc.type | doctoralThesis | de |
dc.title.translated | Analysis and expression of the rat complement proteins factor H and factor I | de |
dc.contributor.referee | Mayer, Frank Prof. Dr. | de |
dc.date.examination | 2003-11-05 | de |
dc.subject.dnb | 33 Medizin | de |
dc.subject.gok | M | de |
dc.description.abstracteng | In this thesis the previously unknown
complete coding cDNA-sequence of rat complement protein factor H
(FH) was revealed. In addition to the identification of the coding
sequence two short variants of rat factor H were recombinantly
expressed. The first recombinant rat FH protein consist of the
first seven domains and was expressed in HEK293 and Mono-Mac-6
cells. The second variant consist of the first four domains and was
recombinantly expressed in SF21-insect cells. Both proteins
demonstrated a complement-inhibitory function in a CH50-hemolysis
assay, which characterized them as fully functional proteins. With
the new monoclonal antibody (mab 4-7D) it was possible to isolate
the native FH protein (20 SCR) by immuno-affinity chromatography
from rat serum. The purified FH was further functionally
characterized. In combination with a rabbit anti-rat factor H
polyclonal IgG it was possible to establish an enzyme-linked
immunosorbent assay (ELISA) for the detection and quantification of
rat FH. The monoclonal anti-rat factor I (FI) antibody (mab
15F11-2) and the newly generated rabbit anti-rat FI polyclonal IgG
were used for the detection of FI. The mab 15F11-2 was used to
prepare an affinity matrix for the isolation of FI from rat serum.
The isolated proteins, factor H and I, and the recombinantly
expressed short versions of rat factor H were tested in diverse
combinations in a CH50-hemolysis assay to investigate whether a
synergistic effect between FH and FI existed. In summary, several
tools for the detection, quantification and structural analysis of
the complement inhibitory protein H and I were generated. After
their purification to homogeneity both factors H and I as well as
two recombinant variants of rat factor H (SCR1-4, SCR1-7) are now
available for further studies of the pathological effects of the
complement system in animal models. | de |
dc.contributor.coReferee | Hardeland, Rüdiger Prof. Dr. | de |
dc.contributor.thirdReferee | Götze, Otto Prof. Dr. | de |
dc.subject.topic | Mathematics and Natural Science | de |
dc.subject.ger | Komplementsystem | de |
dc.subject.ger | Komplementregulatoren | de |
dc.subject.ger | Komplementinhibitoren | de |
dc.subject.ger | Faktor H | de |
dc.subject.ger | Faktor I | de |
dc.subject.eng | Complementsystem | de |
dc.subject.eng | regulators of complement | de |
dc.subject.eng | complement-inhibitory-factors | de |
dc.subject.eng | factor H | de |
dc.subject.eng | factor I | de |
dc.subject.bk | 44.45 | de |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-408-2 | de |
dc.identifier.purl | webdoc-408 | de |
dc.identifier.ppn | 377342769 | de |