Detection of new allotypic variants of bovine antibody λ-light chain and IgG-heavy chain constant regions

Abstract

In den Rinderrassen Alte Deutsche Schwarzbunte (GBP), Deutsches Fleckvieh (GS), Holstein Friesian (HF) und Aubrac (A) wurden die Transkripte der leichten λ- (IGλ) und der schweren IgG-Immunglobulinketten (IgG) analysiert. Dafür wurden Blutproben von zehn zufällig ausgewählten Tieren einer Rasse gewonnen. Die Gesamt-RNA wurde aus den peripheren mononukleären Blutzellen extrahiert und in cDNA umgeschrieben. Mittels genspezifischer Primer wurden sowohl die IGλ als auch die schweren IgG amplifiziert. Nach einer Subklonierung wurden für jede Kette 16 Sequenzen pro Tier ausgewertet. Die konstanten Regionen wurden separiert und mit Datenbankeinträgen verglichen. Für die Definition neuer allotypischer Varianten war die Lage der Substitutionen auf der Oberfläche des Moleküls essentiell. Die Aminosäuresequenzen wurden mit bekannten Kristallstrukturen humaner und muriner Antikörper verglichen und ein 3-dimensionales Model erstellt. Für die zwei transkribierten IGλ-Isotypen wurden drei allotypische Varianten für den Isotypen IGλC2 und fünf allotypische Varianten für den Isotypen IGλC3 identifiziert. Im Falle der IgG konnten die bekannten vier allotypische Varianten für IgG1, zwei allotypische Varianten für IgG2 und eine allotypische Variante IgG3 nachgewiesen werden. Zusätzlich wurde eine neue Variante durch die 3D-Strukturanalyse definiert. Allotypische Unterschiede in Rinder-IgG können die Effektorfunktion des Antikörpermoleküls beeinflussen.