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Sicherheitsforschung und Monitoringmethoden zum Anbau von Bt-Mais: Expression, Nachweis und Wirkung von rekombinantem Cry1Ab in heterologen Expressionssystemen

Biosafety research and monitoring methods of Bt-corn: Expression, detection and effect of recombinant Cry1Ab in heterologous expression systems

by Thu Hang Nguyen
Doctoral thesis
Date of Examination:2004-11-08
Date of issue:2005-04-11
Advisor:Prof. Dr. Gerhard Wolf
Referee:Prof. Dr. Gerhard Wolf
Referee:Prof. Dr. Stefan Vidal
crossref-logoPersistent Address: http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1698

 

 

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Size:2.30Mb
Format:PDF
Description:Dissertation
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Abstract

English

The cropping of genetically modified plants, for example Bt-corn, has raised concerns on their potential ecological risks. In order to recognise their potential effects on nature and environment as early as possible, it is necessary to obtain a basic knowledge about the behaviour of transgenic plants in the environment. In the first part of this study a production of Cry1Ab Bt toxin, which is equivalent to Cry1Ab toxin in Bt-corn, by using recombinant bacteria in large quantities, was established. The biochemical characteristics and the stability of this toxin were examined. Immunological detection methods of the Cry1Ab toxin were developed and optimised. Using these methods, the seasonal and tissue specific expression patterns of transgenic corn lines were quantified in the second part of this study. Field studies were conducted during the growing seasons from 2001 to 2003 and Cry1Ab levels were quantified in the events Mon810 and Bt176. The Cry1Ab content of more than 1600 plant samples covering plant developmental stages, tissue types, geographical areas (Bonn and Halle), and seasons were investigated. A high variability of the expression of Cry1Ab toxin among these conditions was noted. The results of this study contribute to the development of methodical standards, which are necessary for susceptibility studies and resistance testing. The Cry1Ab levels in different plant tissues of Bt-corn in Europe provide a database for the evaluation of the resistance development and risks assessment for Bt-transgenic crops.
Keywords: Bacillus thuringiensis; Cry1Ab-protoxin; active Cry1Ab-toxin; protein inclusion bodies; trypsinization; European corn borer; Ostrinia nubilalis; Bioassay; LC50; toxicity; antibody; ELISA; immunological detection; Bt-corn; expression; toxin level.

Other Languages

Der Anbau gentechnisch veränderter Pflanzen, wie z.B. Bt-Mais, hat in der breiten Öffentlichkeit eine Diskussion über mögliche ökologische Risiken hervorgerufen. Um mögliche Auswirkungen auf Natur und Umwelt so früh wie möglich zu erkennen, werden Kenntnisse zum Verhalten transgener Pflanzen in der Umwelt benötigt. Im ersten Teil wurde ein Produktionsverfahren etabliert, das es ermöglicht, ein dem Bt-Mais äquivalentes Bt-Toxin in größeren Mengen aus rekombinanten Bakterien zu produzieren. Die biochemischen Eigenschaften und die Stabilität dieses Toxins wurden überprüft. Dabei wurden immunologische Nachweismethoden des Cry1Ab-Toxins entwickelt und optimiert. Mit diesen Methoden wurde in dem zweiten Teil der Arbeit das saisonale und gewebespezifische Expressionsmuster der transgenen Maislinien Mon810 und Bt176 quantifiziert. Die Untersuchungen wurden an über 1600 Pflanzenproben in verschiedenen Entwicklungsstadien in drei aufeinander folgenden Jahren (2001-2003) an zwei Versuchsstandorten bei Bonn und Halle durchgeführt. Die Messungen zeigten eine hohe Variabilität der Toxinexpression in den verschiedenen Pflanzenteilen sowohl zwischen den Entwicklungsstadien, als auch zwischen den Jahren und den Standorten. Die hier vorgestellten Ergebnisse leisten einen wichtigen Beitrag zur Entwicklung eines methodischen Standards, mit welchem Suszeptibilitätsstudien und Resistenztests durchgeführt werden können. Der Bt-Gehalt in verschiedenen Pflanzenteilen von Bt-Mais aus den europäischen Anbaugebieten stellt eine Datenbasis zur Beurteilung der Resistenzentwicklung und zur Risikoabschätzung beim Anbau von Bt-Mais dar.
Schlagwörter: Bacillus thuringiensis; Cry1Ab-Protoxin; aktives Cry1Ab-Toxin; Proteineinschlusskörper; Trypsinisierung; Maiszünsler; Ostrinia nubilalis; Biotest; LC50; Toxizität; Antikörper; ELISA; immunologischer Nachweis; Bt-Mais; Expression; Toxingehalt.
 

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