Untersuchungen zur Regulation des Insl3 Gens

Abstract

Die Aufgabe der vorliegenden Arbeit war es zu untersuchen, ob die Insl3-gesteuerte Gubernaculumentwicklung von Androgenen abhängig ist und ob die Überexpression von Insl3 in weiblichen Embryonen zu Entwicklung des Gubernaculums führt und damit den Descensus der Ovarien induziert. Zu diesem Zweck wurden transgene Mäuse hergestellt, die Insl3 im Pankreas überexprimieren. Interessanterweise zeigten sich bei weiblichen transgenen Mäusen bilaterale Inguinalhernien. Daher wurde die Fertilität transgener Weibchen und die Wirkung des Insl2/Insl3 Transgens bei Insl3-defizienten Männchen untersucht. In dieser Arbeit sollten auch Fragen zur Regulation des Insl3 Gens geklärt werden. Innerhalb der Promotorregion des Insl3 Gens sollte durch Gel Retardation Assays ein cis-ständiges Element charakterisiert und der daran bindende transagierende Faktor als Mitglied der hsp110 verwandten Heatshock-Proteinfamilie identifiziert werden. Durch Luciferaseassays sollte die Beteiligung des transagierenden Faktors an der Regulation des Insl3 Gens untersucht werden. Zur Bestimmung der subzellulären Lokalisation des transagierenden Faktors wurden GFP-Fusionsproteine herstellt, in kultivierte Zellen transient transfiziert und fluoreszensmikrokopisch untersucht. Außerdem wurde in diesem Zusammenhang das Expressionsmuster des transagierenden Faktors in der postnatalen Testisentwicklung untersucht und Untersuchungen zur temperaturabhängigen Expression durchgeführt. Um die Transfektionsexperimente zur Ermittlung des 5`-flankierenden Bereich des Insl3 Gens der Maus in vivo zu bestätigen, wurden transgene Mäuse erzeugt und in Northern-Blot-Analysen auf Expression des transgenen Allels untersucht.