Etablierung und Anwendung der Chromatin-Immunopräzipitation für <i>in vivo</i>-Bindungsstudien der bZIP-Transkriptionsfaktoren TGA2.1 und TGA2.2 an Promotoren der Pathogenabwehr in Tabak

Abstract

Das as-1-Element, welches ursprünglich aus dem Blumenkohl-Mosaik-Virus isoliert wurde, ist induzierbar durch Salizylsäure (SA), Auxin und Pathogenbefall. Elemente, die dem as-1-Element ähnlich sind, wurden in Promotoren vieler Pathogenabwehr-Gene gefunden. Zu ihnen zählen z.B. das früh exprimierte Gen Nt103 eine Glutathion-S-Transferase oder das spät exprimierte Gen PR1a. DNA-Bindestudien (EMSA) zeigten, dass das as-1-Element von den bZIP-Transkriptionsfaktoren TGA2.1 und TGA2.2 erkannt wird. Um eine in vivo-Interaktion der TGA-Faktoren mit endogenen as-1-ähnlichen Promotorelementen zu untersuchen, wurde die Chromatin-Immunopräzipitation (ChIP) für Tabak entwickelt. Die Etablierung erfolgte über die Verwendung eines Tetrazyclin-induzierbaren Promotorsystems, bei welchem zwei unterschiedliche Bindungszustände eines artifiziellen Transkriptionsfaktors untersucht werden konnten. ChIP-Experimente mit Pflanzen, die das Reportergenkonstrukt as-1::GUS tragen, zeigten eine konstitutive Bindung des TGA2.2 am as-1-Element nach Salizylsäure-Stimulus, während für PR1a eine induzierbare Bindung nachgewiesen werden konnte.