Identifizierung neuer vegetal lokalisierter RNAs in der Xenopus laevis Oozyte und deren funktionelle Charakterisierung

Abstract

Am vegetalen Pol der Xenopus laevis lokalisierte mRNA Moleküle haben eine wichtige Funktion während der frühembryonalen Entwicklung. Mit dem Ziel, neue vegetal lokalisierte mRNA Moleküle zu isolieren, wurden 10000 cDNA Klone einer mit vegetal-kortikal lokalisierten Transkripten angereicherten cDNA Bibliothek mit Hilfe von Macro- und Microarray Hybridisierungen durchmustert. Dabei konnten 55 neue vegetal lokalisierte mRNA Moleküle identifiziert werden, die sich ausgehend vom räumlichen und zeitlichen Expressionsmuster in die Guppe der früh, spät oder intermediär lokalisierte RNAs einteilen lassen und außerdem interessante Funktionsgruppen bilden. Eine der neu identifizierten und über den späten Lokalisationsweg transportierten RNA kodiert für das Xenopus Dead end Homolog einhypothetischen RNA-Bindeprotein und ist im Keimplasma und in den Keimzellvorläuferzellen während der frühen Xenopus Embryogenese exprimiert. Die Unterdrückung der XDead end Proteintranslation druch Morpholino Oligonukleotid Injektionen resultiert im Ausbleiben einer korrekten Migration der Keimzellvorläuferzellen und deutet auf eine konservierte Funktion XDead ends innerhalb der Keimzellentwicklung hin. In Mikroinjektionsexperimenten konnte ein 251 Nukleotide umfassendes Lokalisationselement identifiziert werden, das für den Transport der XDead end RNA an den vegetalen Pol der Oozyte verantwortlich ist. Dieses Fragment zeigt zusätzlich zur Identifikation eines spezifisch an das XDead end Lokalisationselement bindendes Protein ein für spät lokalisierte RNAs charakteristisches Proteinbindungsmuster.