Studien zur Expression und Lokalisation von P-Typ ATPasen aus Dunaliella bioculata

Abstract

Die Informationen der strukturellen Beschaffenheiten von P-Typ ATPasen, die die subzelluläre Verteilung bestimmen, sind sehr gering. Anhand von DBCA1, einer putativen Ca2+-ATPase und DBPMA1, einer putativen H+-ATPase aus Dunaliella bioculata sollte überprüft werden, ob N-terminale Sequenzbereiche, einschließlich der ersten beiden Transmembransegmente, ausreichen, das Targeting der ATPasen zu vermitteln. N-terminale Sequenzbereiche wurden unter Berücksichtigung mehrerer potentieller Startcodons und dort befindlicher Signalsequenzbereiche mit GFP markiert. Diese wurden sowohl in Tabak-Protoplasten als auch in HeLa- und COS-7-Zellen transformiert. Während in Tabak-Protoplasten keine Expression der ATPase-GFP-Fusionsgene beobachtet werden konnte, zeigten die Fusionsproteine beider ATPasen eine Lokalisation im ER tierischer Zellen. Die Plasmamembran war nicht markiert. Während die Translokation der Fusionsproteine ins ER von der Länge des N-Terminus unabhängig war, führte die gezielte Verkürzung der Fusionsproteine bis zum jeweils nächsten ATG-Triplett in 5`->3`-Richtung zu einem deutlichen Anstieg der Proteinsynthese beider ATPasen.