Chromatinstruktur und Regulation der Genexpression am Histidin/Adenin-Verzweigungspunkt in Hefe und Aspergillus
Chromatin Structure and Regulation of Gene Expression at the Histidine/Adenine Branch Point in Yeast and Aspergillus
von Oliver Valerius
Datum der mündl. Prüfung:2001-05-27
Erschienen:2001-10-23
Betreuer:Prof. Dr. Gerhard Braus
Gutachter:Prof. Dr. Gerhard Braus
Gutachter:Prof. Dr. Botho Bowien
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Format:PDF
Description:Dissertation
Zusammenfassung
Englisch
Imidazole glycerole phosphate (IGP) synthase (E.C.2.4.2. & E.C.4.3.2.4) catalyzes the fifth and the sixth reaction step of the histidine biosynthesis. The byproduct of the reactions, AICAR, is also an intermediate compound of the de novo biosynthesis of purines. Metabolic flux in this biosynthesis generates the so-called purine salvage pathway. In the yeast Saccharomyces cerevisiae the transcription of the IGP synthase encoding gene, HIS7, is regulated upon amino acid and purine availability.Therefore the metabolic link of both biosynthetic pathways is also reflected on the level of regulation of the gene at the crossways. In this thesis, the regulation of the homologous gene of a filamentous fungus was shown to respond to amino acid and purine availability as in yeast. Overexpression of this Aspergillus nidulans hisHF gene results in a block of formation of sexual fruiting bodies at an early step of development. The appropriate regulation of hisHF expression is therefore linked to the complex developmental program of cleistothecia formation. All eukaryotic genes are part of chromatin that per se acts repressive on gene expression. Therefore chromatin-modifying activities are required for accurate gene expression by overcoming this repression. The transcriptional activation of the yeast HIS7 gene upon amino acid starvation requires the chromatin remodeling complex Swi/Snf. Together with the transcription factors Gcn4p and Abf1p this complex changes the nucleosomal promoter structure. In comparison, the activation of HIS7 transcription upon purine limitation by the transcription factor Bas1p/Bas2p requires a chromatin modifying activity that acetylates nucleosomes in a GCN5-dependent manner. A nucleosome located immediately upstream of the HIS7 promoter seems to represent the border to the proceeding ARO4 gene. Possibly this nucleosome prevents transcriptional interference between the tandemly orientated genes and permits such a short intergenic region as it is typical for this eukaryotic microorganism.
Keywords: Hefe; Aspergillus nidulans; chromatin; gene expression; histidine; adenine; Gcn4p; Bas1/2p
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Das Enzym Imidazol-glyzerol-phosphat (IGP) Synthase (E.C.2.4.2.14 & E.C.4.3.2.4) katalysiert den fünften und sechsten Reaktionsschritt der Histidinbiosynthese. Das bei diesen Reaktionen entstehende Nebenprodukt AICAR ist gleichzeitig ein Intermediat der de novo Biosynthese von Purinen und fließt in diese mit ein. Diese metabolische Verknüpfung beider Biosynthesen spiegelt sich in der Hefe Saccharomyces cerevisiae auch auf der Ebene der Regulation des für die IGP-Synthase codierenden HIS7 -Gens durch Aminosäure- und Purinverfügbarkeit wider. In der vorliegenden Arbeit wurde zunächst das homologe Gen eines filamentösen Pilzes isoliert und seine Regulation durch Aminosäure-und Purinverfügbarkeit nachgewiesen. Eine starke Überexpression dieses hisHF-Gens aus Aspergillus nidulans führt zu einer Blockierung der sexuellen Fruchtkörperbildung in einem frühen Stadium der Entwicklung. Eine genaue Regulation der hisHF-Expression ist daher Voraussetzung für das Durchlaufen des komplexen Entwicklungsprogrammes der Cleistothecien-Bildung. Eukaryotische Gene liegen im Chromatinverbund vor, welches per se repressiv auf die Genexpression wirkt. Die Zelle benötigt chromatinmodifizierende Aktivitäten, die diese Repression überwinden können. Die transkriptionelle Aktivierung des HIS7-Gens durch Aminosäuremangel benötigt dafür die Anwesenheit des Swi/Snf-Komplexes und der Transkriptionsaktivatoren Gcn4p und Abf1p, die gemeinsam eine Veränderung der Nukleosomenverteilung an dem HIS7-Promotor bewirken. Im Vergleich dazu benötigt die HIS7-Aktivierung bei Purinmangel durch den Transkriptionsaktivator Bas1p/Bas2p eine chromatinmodifizierende Aktivität, die Nukleosomen GCN5-abhängig azetyliert. Darüberhinaus stellt ein Nukleosom, das sich direkt stromaufwärts des HIS7-Promotors befindet, eine Grenze zum vorhergehenden ARO4-Gen dar. Möglicherweise dient es dem Schutz vor transkriptioneller Interferenz zwischen beiden gleichgerichteten Genen, die nur durch eine kurze intergenische Region getrennt sind.
Schlagwörter: Hefe; Aspergillus nidulans; Chromatin; Genexpression; Histidine; Adenine; Gcn4p; Bas1/2p