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Characterisation of Vti1b and Vti1a proteins and generation of knock-out mice.

Studies of endosomal transport proteins using targeted gene replacement of SNAREs in mouse.

dc.contributor.advisorFischer von Mollard, Gabriele Prof. Dr.de
dc.contributor.authorAtlachkine, Vadimde
dc.date.accessioned2012-04-16T14:46:27Zde
dc.date.available2013-01-30T23:50:27Zde
dc.date.issued2002-07-09de
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-ABE5-7de
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-91
dc.description.abstractGenomische DNA Fragmente für Vti1b und Vti1a wurden isoliert und die chromosomale Bereiche charakterisiert. Durch gezielte Ausschaltung der Gene wurden Mausmutanten erzeugt. Es wurde gezeigt, dass Vti1b kein essentielles Protein ist. Durch die Abwesenheit von Vti1b hat sich die Menge an Syntaxin 8 in allen Zellen und Geweben reduziert, während die Menge an Syntaxin 8 mRNA unverändert blieb. Die Vti1b defizienten Tiere zeigen einen heterogenen Phänotyp in Form von normal großen und kleinen Mäusen. Die normal großen Vti1b-knockout Mäuse haben keine nachweisbaren Defekte im Transport zum Lysosom, aber die Hepatozyten der kleinen Vti1b knockout Mäusen zeigen eine Verlangsamung im Proteintransport von späten Endosomen zu Lysosomen, erkennbar z.B. durch verlangsamten Abbau von EGF-Rezeptor und Asialofetuin, und reduzierte Reifung von Cathepsin D. Die elektronenmikroskopischen Daten haben gezeigt dass multivesikuläre späte Endosomen und Autophagosomen in den Hepatozyten der kleinen Vti1b-defizienten Mäuse angereichert waren. Häufig waren die Autophagosomen in engem Kontakt angeordnet und waren im Vorgang der Fusion begriffen, wie es in Hepatozyten der Wildtyp- und der nomal großen Vti1b-defizienten Mäuse nicht beobachtet wurde. Im Vergleich zu Vti1b war der chromosomale Bereich für Vti1a wenigstens dreimal so groß. Es wurden zwei Targeting DNA Konstrukte mit Hilfe von zwei unterschiedlichen Knockout Strategien hergestellt. Zwei embryonale Stammzellklone, die eine mutierte Kopie von Vti1a tragen, sind selektiert und verwendet worden, um chimäre Mäuse zu erhalten.de
dc.format.mimetypeapplication/pdfde
dc.language.isoengde
dc.rights.urihttp://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htmde
dc.titleCharacterisation of Vti1b and Vti1a proteins and generation of knock-out mice.de
dc.title.alternativeStudies of endosomal transport proteins using targeted gene replacement of SNAREs in mouse.de
dc.typedoctoralThesisde
dc.title.translatedCharacterisierung von Vti1b und Vti1a Proteinen und Erzeugung von knockout Mäusen.de
dc.contributor.refereeFigura, Kurt von Prof. Dr. Dr. h.c.de
dc.date.examination2002-06-20de
dc.subject.dnb570 Biowissenschaften, Biologiede
dc.description.abstractengGenomic DNA for Vti1b and Vti1a was isolated and the chromosomal regions characterised. Using targeted gene disruption mouse mutants lacking Vti1b constitutively were generated. It was shown that Vti1b was a non-essential protein. The absence of Vti1b reduced the levels of syntaxin 8 protein in all cells and tissues while syntaxin 8 mRNA levels remained unchanged. Vti1b knockout had phenotypic heterogeneity which was manifested by the appearance of mice of normal and small size. Normal size Vti1b knockout mice showed no detectable defects in late endosomal trafficking, whereas hepatocytes from small ones displayed a retardation in cargo transport from late endosomes to lysosomes marked by slower EGF-R degradation, delayed asialofetuin degradation and reduced cathepsin D maturation. Electron microscopic data showed that the number of multivesicular late endosomes and of autophagosomes was higher in hepatocytes of small Vti1b deficient mice, quite often autophagosomes were in close contact and were in the process of fusion. That was not observed in hepatocytes of wild type and normal size Vti1b deficient mice.It was also shown that the Vti1a chromosomal region is at least three times larger than the Vti1b locus. Two targeting DNA constructs were generated utilising two different knockout strategies for obtaining Vti1a deficient mice. Two embryonic stem cell clones carrying a constitutively mutated Vti1a gene copy were selected and used for obtaining chimeric mice.de
dc.contributor.coRefereeGottschalk, Gerhard Prof. Dr.de
dc.contributor.thirdRefereeGradmann, Dietrich Prof. Dr.de
dc.title.alternativeTranslatedUntersuchungen von endosomalen Transportproteinen durch Genausschaltung von SNAREs in Maus.de
dc.subject.topicMathematics and Computer Sciencede
dc.subject.gerSNARE Proteinede
dc.subject.gerVti1bde
dc.subject.gerVti1ade
dc.subject.gerKnockout Mäusede
dc.subject.gerProteintransportde
dc.subject.gerspäten Endosomende
dc.subject.gerLysosomende
dc.subject.engSNARE proteinsde
dc.subject.engVti1bde
dc.subject.engVti1ade
dc.subject.engknockout micede
dc.subject.engprotein transportde
dc.subject.englate endosomesde
dc.subject.englysosomesde
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:7-webdoc-1111-5de
dc.identifier.purlwebdoc-1111de
dc.affiliation.instituteBiologische Fakultät inkl. Psychologiede
dc.subject.gokfullWAde
dc.subject.gokfullWHde
dc.subject.gokfullWHC700de
dc.subject.gokfullWHF800de
dc.identifier.ppn353784583


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