Charakterisierung der konservierten Domänen des Transkriptionsfaktors N.t.BZI-1

Abstract

Durch den Vergleich der verwandten Transkriptionsfaktoren konnten die konservierten Domänen des Transkriptionsfaktors BZI-1 definiert werden. Da Transkriptionsfaktoren einen modularen Aufbau besitzen, ist davon auszugehen, dass die einzelnen Domänen spezifische Aufgaben im Verlauf der Aktivität von BZI-1 übernehmen. Ziel dieser Arbeit ist es diesen Domänen die spezifischen Funktionen zuzuweisen. Mit Hilfe von in vitro-Analysemethoden soll der Einfluss der Domänen auf die DNA-Bindung des BZI-1-Transkriptionsfaktors untersucht werden. Hierbei soll die Spezifität der basischen Domäne für DNA-cis-Elemente und die Funktionen der weiteren Domänen in diesem Zusammenhang untersucht werden. Durch einen Kinase-Assay sollen Phosphorylierungsereignisse als posttranslationale Modifikationen nach unterschiedlichen Stimuli nachgewiesen werden. Durch eine Grobkartierung der Phosphorylierungsstellen kann so möglicherweise eine Funktionszuweisung an die Domänen erfolgen. Eine Charakterisierung der Funktion der Domäne 1 ist möglicherweise durch eine weitere Analyse der Interaktion mit ANK1 möglich. Es soll aufgeklärt werden, ob die detektierte Interaktion eine funktionale Beteiligung an der Translokation des BZI-1 in den Kern besitzt oder die DNA-Bindung beeinflusst. Die Funktion der putativen Kernlokalisierungssequenz in der basischen Domäne und eventuelle Einflüsse der anderen Domänen sollen durch transiente Expressionstudien von BZI-1-GFP-Fusionsproteinen in Tabakmesophyll-Protoplasten analysiert werden. Um die komplexen Zusammenhänge im Rahmen der Pathogenantwort und dem damit verbundenen Einfluss der Auxin-Signaltransduktion zu verstehen, sollen transgene Pflanzen hergestellt und die Funktion des Transkriptionsfaktors BZI-1 in planta analysiert werden. Durch die unterschiedlichen phänotypischen Veränderungen der BZI-1-N-exprimierenden Pflanzen war ein System zur Analyse von Doppeldeletionsderivaten vorhanden. Durch die zusätzlich eingefügten Domänendeletionen soll durch die Revertierung des Phänotyps in den unterschiedlichen Funktionszusammenhängen ein Nachweis der Relevanz der einzelnen Domänen in planta zu führen sein. Als Funktionszusammenhänge sollen die Auxin-Antwort, die Blütenentwicklung und Pollenbildung und die Pathogenantwort charakterisiert werden.