Analyse der differentiellen Expression von Transportfaktoren und deren Funktion bei dem nukleocytoplasmatischen Transport von TFIIIA

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurden die minimalen transportkompetenten Strukturen des Transkriptionsfaktors IIIA auf die Zinkfinger 3, 4 und 7 bis 9 eingegrenzt. Die transportvermittelnden Zinkfingerregionen flankieren die RNA bindenden Zinkfinger 4, 5, 6 und 7. Dieser Befund steht in Übereinstimmung mit unserer Arbeitshypothese. Die Bindung von 5S RNA an TFIIIA maskiert das NLS und führt so zur cytoplasmatischen Retention des 7S RNP Komplexes.Mit den in Xenopus laevis neuen Karyopherin alpha Varianten konnte gezeigt werden, dass TFIIIA-delta-56 bei Verwendung von frisch erstellten Karyopherin alpha Fusionsproteinen in vitro spezifisch an alpha1 und alpha2 binden kann. Beide Varianten zeigen in RT-PCR und whole mount" Analysen ein Expressionsprofil, das dem von TFIIIA entspricht.Aufgrund der identischen Expressionsmusterprofile von ribosomalen Proteinen, transportfaktorassoziierten Proteinen und Transportfaktoren wurde die Existenz einer neuen Synexpressionsgruppe nachgewiesen. Aus diesem Befund ging der experimentelle Ansatz hervor, neue in den Transport ribosomaler Proteine involvierte Gene durch optische Selektion auf das in der Synexpressionsgruppe auftretende Expressionsmuster zu isolieren. Für die Durchmusterung der angefertigten cDNA Bank aus embryonalem Augengewebe wurde ein maschinelles in situ Hybridisierungsverfahren angewendet. Dass der Ansatz der optischen Selektion zu einer Anreicherung der gewünschten Gene führt, zeigt der hohe Anteil der in der Durchmusterung isolierten Klone ribosomaler Gene. Aus der Analyse gingen zwei Klone hervor, die in den Kerntransport involviert sind. Es wurden fünf weitere Kandidatenklone identifiziert, die in den nukleocytoplasmatischen Transport involviert sein könnten.