Regulation of HPr phosphorylation in Mycoplasma pneumoniae

Abstract

Das Genom des Mollicuten Mycoplasma pneumoniae enthält lediglich 688 Gene. Zu den wenigen erhalten gebliebenen Proteinen mit regulatorischer Funktion gehört die HPr-Kinase/Phosphorylase (HPrK/P) aus dem Phosphoenolpyruvat:Zucker-Phosphotransferase-System. In dieser Arbeit wurde das in vivo Aktivitätsprofil der HPrK/P unter verschiedenen Wachstumsbedingungen mit nativen Western-Blots untersucht. Die HPrK/P ist nur in Gegenwart von Glycerol als C-Quelle aktiv und phosphoryliert unter diesen Bedingungen ihr Target HPr an der regulatorischen Position Ser-46. Für die Aufklärung der physiologischen Rolle der HPrK/P wurde eine hprK Mutante mit Hilfe der Haystack-Mutagenese einer neuartigen, in dieser Arbeit entwickelten Strategie isoliert. Die hprK-Mutante war nicht länger in der Lage, HPr(Ser-P) zu bilden, weder in vitro noch in vivo. Jedoch konnten Zellextrakte der hprK-Mutante nach wie vor HPr(Ser-P) dephosphorylieren. Dieser Befund führte zur Identifizierung der PP2C-Proteinphosphatase PrpC als dem ersten Protein neben HPrK/P selbst, welches HPr(Ser-P) zu dephosphorylieren vermag.