Analysis of ether-à-go-go potassium channel (Eag1) splice variants in melanoma cells

Abstract

Der menschliche Ether-à-go-go Kaliumkanal (hEag1) nachgewiesen werden in adulten Gehirn und in beiden Tumorzelllinien und primären Tumoren. Das physiologische Funktion dieses Kanals im Gehirn bleibt zu aufgeklärt. Die Anwesenheit von hEag1 in Tumoren hat zu einem Anstieg in Verbindung gebracht worden in Proliferation. Veröffentlichte Berichte behaupteten, dass die IGR39 Melanomzellen Linie ist für hEag1 negativ, was erlaubt diese Zelle als negativ verwendet werden zu steuern. Wir beobachteten, dass IGR39 Zellen positiv Verstärkung für Shows hEag1, auf mRNA-Ebene, und ein Protein mit kompatiblen Molekulargewicht und Reaktivität für hEag1 Antikörper wurde in Western-Blot Experimente. Die biophysikalischen Eigenschaften der aktuellen in IGR39 registriert präsentiert eine andere Kinetik, aber es ist noch empfindlich durch Medikamente blockiert und siRNA spezifisch für hEag1. Mit molekularbiologischen Techniken, wir fanden die Expression von zwei neuen Splice-Varianten, E65 und E70, in zwei Melanom-Zelllinien (IPC298 und IGR39) und in neuralen Stammzellen. Die beiden Spleißvarianten haben keine Transmembrandomänen und bilden keine funktionale membrangebundene Kanal. Eine Charakterisierung des neuen Splice Varianten wurde in Xenopus Oozyten leavis getan, um die Wechselwirkung von verifizieren die Spleißvarianten mit full-length hEag1 (fl-hEag1). Elektrophysiologische Messungen der Oozyten, die zusammen mit der injizierten Spleißvariante E65 und die fl-hEag1 zeigte einen gleichgerichteten Strom mit verminderte Amplitude. Auch die Co-Injektion von E65 und FL-hEag1 ermöglicht diese Eizellen zu reifen, die das gleiche Ergebnis wurde der Behandlung von Oozyten mit Progesteron. Basierend auf diesen Ergebnissen haben wir Schluss, dass IGR39 Zelllinie ausdrücken Eag1 Kanäle und die Spleiß Varianten finden in diesen Melanomzellen konnte sowohl die Interaktion mit dem sein in voller Länge Eag1 oder spielen eine Rolle bei der intrazellulären Signalwege.