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dc.contributor.advisor Fritz, Hans-Joachim Prof. Dr. de
dc.contributor.author Kansy, Eva de
dc.date.accessioned 2012-04-16T14:53:23Z de
dc.date.available 2013-01-30T23:50:36Z de
dc.date.issued 2004-05-14 de
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-ADB4-7 de
dc.description.abstract Unter Berücksichtigung berechneter Parameter und Verwendung entsprechender Codonmischungen bei der DNA Synthese wurde ein Genrepertoire mit einer bestimmten Populationsstruktur geschaffen. Die partielle codonweise Zufallsmutagenese wurde basierend auf dem Histidin-Bindeprotein-Gens hisJ aus E. Coli nach der Trinukleotidphosphoramidit-Methode durchgeführt. Das Genrepertoire wurde aus Oligonukleotiden über eine primerless PCR und eine anschließende primed PCR assembliert.Die experimentelle Populationsstruktur wurde durch DNA-Sequenzanalyse und statistische Datenanalyse charakterisiert. Die erwarteten Werte wurden mit den experimentellen Ergebnissen verglichen und Rückschlüsse auf das Reaktionsverhalten der Trinukleotide während der chemischen Synthese gemacht.In einem Modellexperiment wurde das Rezeptorenrepertoire als Fusionsprotein mit dem Phagenprotein gpIII auf der Oberfläche von M13 Phagen präsentiert, um als Ausgangspunkt für die Selektion einer Biotin-bindenden Variante zu dienen. Um die Anzahl der Deletionen im Repertoire zu reduzieren, die vermutlich während der DNA Synthese entstanden waren, wurde das randomisierte hisJ-Gen als Fusion mit dem beta-Lactamasegen im Periplasma von E. Coli exprimiert.Auf diese Weise wurden im Ampicillin-Medium nur die Varianten selektiert, die als Fusion mit beta-Lactamase vorlagen und keine Rasterschubmutationen enthielten. de
dc.format.mimetype application/pdf de
dc.language.iso ger de
dc.rights.uri http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm de
dc.title Kombinatorische Synthese einer Genbibliothek und Analyse ihrer statistischen Struktur de
dc.type doctoralThesis de
dc.title.translated Combinatorial Synthesis of a Gene Library and Analysis of its Statistical Structure de
dc.contributor.referee Schwienhorst, Andreas PD Dr. de
dc.date.examination 2003-11-04 de
dc.description.abstracteng Considering calculated parameters and using appropriate mixing ratios of codons during the DNA synthesis a gene library with determined population structure was generated. The partial codonwise random mutagenesis was carried out using the trinucleotide phosphoramidite approach based on histidine-binding protein gene hisJ from E. Coli. The gene library was assembled using a primerless and a final primed PCR.The experimental population structure was described by DNA sequence and statistical data analysis. From the comparison of the expected with the experimental values, the reaction of the trinucleotide phosphoramidites during the DNA synthesis was deduced. The HisJ library was displayed in a model experiment on the surface of the M13 phage as a fusion with gpIII to select a biotin binding variant. In order to reduce deletions in the gene library, which probably resulted from the DNA synthesis, the randomized hisj gene was expressed in the periplasm of E. Coli as a fusion with the beta-lactamase gene. HisJ-beta-lactamase fusion proteins selected in this way in ampicillin medium contained no frameshift mutations. de
dc.contributor.coReferee Laatsch, Hartmut Prof. Dr. de
dc.contributor.thirdReferee Hoyermann, Karlheinz Prof. Dr. de
dc.subject.topic Mathematics and Computer Science de
dc.subject.ger kombinatorische DNA Synthese de
dc.subject.ger Populationsstruktur de
dc.subject.ger HisJ de
dc.subject.ger Phage Display de
dc.subject.ger 570 Biowissenschaften de
dc.subject.ger Biologie de
dc.subject.eng combinatorial DNA synthesis de
dc.subject.eng population structure de
dc.subject.eng HisJ de
dc.subject.eng phage display de
dc.subject.bk 42 de
dc.identifier.urn urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-256-7 de
dc.identifier.purl webdoc-256 de
dc.affiliation.institute Biologische Fakultät inkl. Psychologie de
dc.subject.gokfull WJ de
dc.identifier.ppn 391742345 de

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