Studies on Expression and Function of Vsig1 Gene

Abstract

Das Ziel dieser Studie war die Bestimmung des Expressionsmusters von Vsig1 während der Hodenentwicklung und die Analyse der conditionellen Vsig1-Knockout Maus sowie der transgenen Cyto-und Vsig1 Villin-Vsig1 Maus. Expressionsanalysen zeigen, dass Vsig1 zwei alternative mRNA-Varianten transkribiert: das 2,4-kb lange Vsig1A und das 1,6-kb lange Vsig1B. Die Vsig1A Transkript wird durch Sequenzen die in der 5 'flankierenden Region des Exon1a lokalisiert sind, reguliert, während das kürzere Transkript Vsig1B durch Sequenzen reguliert wird, die in der 5 'flankierenden Region des Exon1b lokalisiert sing. Northern Blot-Analysen zeigten, dass Vsig1A in Sertoli-Zellen des Hoden und im Drüsenepithel des Magens exprimiert wird. RT-PCR-Analysen zeigten die Expression von Vsig1A während der Embryonalentwicklung der Hoden. Die Expression von Vsig1B wurde erstmals im Hoden das postnatalen Tags 20 nachweisbar und deutet darauf hin, dass die Expression von Vsig1B auf haploide Spermatiden beschränkt ist. Immunofluoreszenz Analysen von histologischen Hodenschnitten und Keimzellsuspensionen ergab, dass VSIG1 im Zentrosom sich teilender Keimzellen und länglichen Spermatiden lokalisiert ist. Western-Blot-Analysen zeigte die Anwesenheit des kürzeren VSIG1B Proteins in der cytoplasmatischen Fraktion des Hodenextrakts. Die Lokalisation von zentrosomale VSIG1 wurde ebenfalls durch Immunfluoreszenzfärbung von primären Fibroblasten, NIH 3T3 embryonaler Fibroblasten und embryonaler Stammzellen (ESC) bestätigt. Die VSIG1 wurde mit γ-Tubulin, einem zentrosomalen Marker, im Zentrosomen aller Stadien der mitotischen Teilung kolokalisiert.