Role of Adaptor Proteins in MPR sorting
Funktion von Adaptorproteinen in der MPR-Sortierung
Guruprasad Medigeshi Ramarao
Doctoral thesis
Date of Examination:
2003-05-08
Date of issue:
2003-06-04
Advisor:
Schu, Peter Prof. Dr.
Referee:
Figura, Kurt von Prof. Dr. Dr. h.c.
Referee:
Braus, Gerhard Prof. Dr.
Referee:
Mösch, Hans-Ulrich PD Dr.
Persistent Address: http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-AE79-3
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Name:
medigeshi_ramarao.pdf
Size:
18,5 MB
Format:
PDF
Description:
Dissertation
Abstract
English
Mannose 6-phosphate receptors mediate sorting of lysosomal enzymes and thus play an important role in lysosomal biogenesis. They bind to the mannose 6-phosphate residues on the lysosomal enzymes at the TGN and transport them to the endosomes from where the enzymes are further transported to lysosomes. The receptors return to the TGN from endosomes for additional sorting cycles. The sorting of MPRs from the TGN to endosomes involves monomeric (Golgi localized gamma-"ear" domain-containing ARF binding proteins or GGAs) and heterotetrameric adaptor complexes (APs) either in co-operation with or independent of each other by clathrin-coated vesicles. We generated chimeras of the cargo-binding subunit of AP-1(µ1A) and AP-2 (µ2) and identified a new domain of µ1A important for the sorting of MPRs. We also characterized the retrograde transport of MPR46 from endosomes to the TGN by an in vitro transport assay. We identified the SNARE proteins and the Rab GTPase involved in this path way. We generated cell lines deficient for both AP-1 and one of the GGAs (GGA1 or GGA2) to analyze the function of these two adaptors in TGN-to-endosome sorting of the MPRs.
Keywords: Adaptors; GGAs; MPR; SNAREs; Rab...
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Mannose 6-phosphat Rezeptoren transportieren lösliche lysosomale Proteine und sind daher essentiel für die Biogenese des Lysosomes. Sie binden die Enzyme im trans-Golgi Netzwerk und transportieren sie in Endosomen, wo sie aufgrund des niedrigeren pH-Wertes abdissoziieren. Die Rezeptoren kehren zurück zum trans-Golgi Netzwerk und stehen für einen weiteren Transport zur Verfügung. Der Transport der Rezeptoren erfordert die monomeren Adaptor-Proteine GGA und den heterotetrameren Adaptor-Protein Komplex AP-1. Wir generierten und analysierten chimere Proteine der Rezeptor-bindenden Untereinheit µ1 des AP-1 und der homologen µ2 Untereinheit des AP-2 Komplexes der Plasmamembran und identifizierten so eine neue funktionelle Domäne in µ1 für die Sortierung der Rezeptoren. Wir analysierten auch den Endosomen - trans-Golgi Netzwerk Transport der Rezeptoren in vitro und identifizierten die beteiligten SNARE und Rab Proteine. Desweiteren erzeugten wir Zelllinien, die defizient waren für AP-1 und GGA um die Funktion der beiden Adaptoren für den trans-Golgi Netzwerk - Endosomen Transport der Rezeptoren näher zu untersuchen.
Schlagwörter: Adaptoren; GGAs; MPRs; SNAREs; Rab..
