Navigation ▼

Show simple item record

dc.contributor.advisor Braus, Gerhard Prof. Dr. de
dc.contributor.author Pries, Ralph de
dc.date.accessioned 2012-04-16T14:56:13Z de
dc.date.available 2013-01-30T23:50:39Z de
dc.date.issued 2003-02-27 de
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-AE80-2 de
dc.description.abstract Die `Allgemeine Kontrolle der Aminosäurebiosynthese` der Hefe Saccharomyces cerevisiae ist ein gut charakterisiertes regulatorisches Netzwerk, welches die ausreichende Aminosäureversorgung des Organismus gewährleistet. Dieses System wird durch Stimuli wie beispielsweise Aminosäuremangel, Purinmangel, UV Strahlung, Glukosemangel oder hohe Salzkonzentrationen aktiviert. Die Aktivierung der `Allgemeinen Kontrolle der AminosSurebiosynthese` resultiert in einer gesteigerten Transkription von mehr als 500 Zielgenen aus vielen unterschiedlichen Biosynthesewegen. In den vergangenen Jahrzehnten haben zahlreiche Untersuchungen die Kenntnisse ber dieses Netzwerk und dessen zentralen Transkriptionsaktivator Gcn4p enorm erweitert.Gcn4p ist ein klassischer bZIP Transkriptionsaktivator, der als Homodimer an konservierte Konsensussequenzen in den Promotorregionen seiner Zielgene bindet. Bei ausreichender Aminosäureversorgung ist Gcn4p ein schwach exprimiertes und sehr instabiles Protein. Aminosäuremangel führt zu einer gesteigerten Expression und Stabilität von Gcn4p. Ein Ziel dieser Arbeit war die Lokalisierung von Gcn4p aus S. cerevisiae und des homologen Proteins CPCA aus Aspergillus nidulans. Mittels Fluoreszenzmikroskopie wurde gezeigt, dass Gcn4p und CPCA unabhängig von der Aminosäureversorgung im Zellkern lokalisiert sind. Deletions- und heterologe Transportexperimente haben gezeigt, dass der Kerntransport von Gcn4p durch zwei funktionelle Kernlokalisierungssequenzen (NLS) vermittelt wird, von denen jedoch nur eine in CPCA von A. nidulans konserviert vorliegt. Untersuchungen verschiedener S. cerevisiae Importin-Mutantenstämme haben verdeutlicht, dass Importin a Srp1p und Importin b Kap95p fr den Kerntransport von Gcn4p erforderlich sind. Des weiteren war es ein Anliegen dieser Arbeit, die Regulation der Proteinstabilität von Gcn4p zu untersuchen. Die Stabilität von Gcn4p ist abhängig von der intrazellulSren Lokalisierung, wobei die spezifische Degradation von Gcn4p auf den Zellkern beschränkt ist. Die zyklinabhängige Kinase (CDK) Pho85p bewirkt durch Phosphorylierung von Thr165 die Degradation von Gcn4p und ist ebenfalls ein berwiegend im Zellkern lokalisiertes Protein. Die Aktivität von Pho85p wird unter Aminosäuremangelbedingungen durch den CDK Inhibitor Pho81p beeinflusst. Ein gestsrter Gcn4p-Kerntransport durch Deletion der NLS Motive oder durch einen defekten Transportmechanismus in einer yrb1 Mutante resultiert in stabilisiertem Gcn4p, was belegt, dass die Regulation der Gcn4p-Stabilität in Abhängigkeit von der Aminosäureversorgung im Zellkern stattfindet. de
dc.format.mimetype application/pdf de
dc.language.iso eng de
dc.rights.uri http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm de
dc.title Localization and Stability of the Transcriptional Activator Gcn4p of Saccharomyces cerevisiae de
dc.type doctoralThesis de
dc.title.translated Lokalisierung und Stabilität des Transkriptionsaktivators Gcn4p in Saccharomyces cerevisiae de
dc.contributor.referee Braus, Gerhard Prof. Dr. de
dc.date.examination 2003-01-28 de
dc.subject.dnb 570 Biowissenschaften, Biologie de
dc.description.abstracteng The «general amino acid control« (GAAC) of the yeast Saccharomyces cerevisiae is a well characterized regulatory network which secures a sufficient amino acid supply of the organism. This system can be induced by different environmental stimuli like e. g. amino acid starvation, purine limitation, UV radiation, glucose limitation or high salinity. Induction of the general amino acid control results in the transcriptional activation of more than 500 target genes from many different biosynthetic pathways. In the last decades numerous investigations have broadened the understanding of this network and primarily of its central trancriptional activator protein Gcn4p.Gcn4p represents a classical bZIP transcription factor, which recognizes as a homodimer conserved consensus sites within the promoter regions of its target genes. Gcn4p is known as a weakly expressed and highly unstable protein in sated cells. The Gcn4p translation rate and protein stability significantly increase in response to amino acid limitation.One aim of this work was to localize S. cerevisiae Gcn4p and the homologous protein CPCA of the mold Aspergillus nidulans within the cell. Fluorescence microscopy demonstrated that Gcn4p/CPCA are predominantly nuclear proteins, independently of the presence or absence of sufficient amounts of amino acids. Deletion and heterologous transfer experiments revealed that nuclear import of S. cerevisiae Gcn4p is secured by two functional nuclear localization sequences (NLS), from which only one is conserved in A. nidulans CPCA. Analyses of a set of S. cerevisiae importin mutant strains gave evidence that Gcn4p translocation requires importin a Srp1p and importin b Kap95p. A second aim was to study protein stability regulation of Gcn4p. Regulation of stability of Gcn4p was dependent on its subcellular localization, demonstrating a compartment specific degradation of Gcn4p within the nucleus. The cyclin dependent kinase (CDK) Pho85p, which initiates Gcn4p decay by phosphorylation at Thr165, is as well as Gcn4p a predominantly nuclear protein. Pho85p activity is affected by the CDK inhibitor Pho81p in cells starved for amino acids. Preventing Gcn4p to enter the yeast nucleus either by deleting its NLSs or because of an affected nuclear import cycle in a yrb1 mutant strain resulted in stabilized Gcn4p, indicating that efficient amino acid dependent Gcn4p stability regulation occurs exclusively in the yeast nucleus. de
dc.contributor.coReferee Liebl, Wolfgang Prof. Dr. de
dc.subject.topic Mathematics and Computer Science de
dc.subject.ger Saccharomyces cerevisiae de
dc.subject.ger Gcn4p de
dc.subject.ger Zellkern de
dc.subject.ger Proteinstabilität de
dc.subject.eng Saccharomyces cerevisiae de
dc.subject.eng Gcn4p de
dc.subject.eng Nucleus de
dc.subject.eng protein stability de
dc.subject.bk 42.13 Molekularbiologie de
dc.identifier.urn urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-521-9 de
dc.identifier.purl webdoc-521 de
dc.affiliation.institute Biologische Fakultät inkl. Psychologie de
dc.subject.gokfull WU Mikrobiologie WU Mikrobiologie de
dc.identifier.ppn 36285324X de

Files in this item

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record