Elektrophysiologische Untersuchungen von Transporteigenschaften des Natrium-Dikarboxylat-Kotransporters aus der Flunderniere

Abstract

Ziel dieser Arbeit war eine weitergehende elektrophysiologische Charakterisierung des Natrium-Dikarboxylat-Kotransporters aus der Flunderniere (fNaC3) an Xenpous-laevis-Oozyten. Dazu wurde neben dem Wildtyp auch die Mutante S513C untersucht, die eine höhere Empflindlichkeit gegenüber Lithium haben sollte. Die Mutante unterschied sich nicht vom Wildtyp. Beim fNaC3 reduzierten hohe (20mM) Lithiumchloridkonzentrationen den Succinat-induzierten Strom mit Natrium als Kation auf 20% des Stroms ohne Lithium. Lithium hatte eine apparente Inhibitionskonstante für den Succinat-induzierten Strom von 1,7mM, unabhängig vom Klemmpotential. Geringe Lithiumkonzentrationen (1mM) hatten nur einen sehr geringen Einfluss auf die Affinität des Natrium-Dikarboxylat-Kotransporters für Succinat. Die Transporteigenschaften des fNaC3 für 2,2- und 2,3-Dimethylsuccinat wurden untersucht. Die Affinität für 2,2-Dimethylsuccinat war mit der Halbsättigungskonstanten von 7 ± 3 µM deutlich größer als für 2,3-Dimethylsuccinat (32 ± 25 µM) oder Succinat (29 ± 7 µM). Die Halbsättigungskonstanten von Succinat und 2,2-Dimethylsuccinat waren unabhängig vom Klemmpotential, während die Halbsättigungskonstante von 2,3-Dimethylsuccinat bei Depolarisation zunimmt. Der maximale induzierte Strom war bei 2,2-Dimethylsuccinat etwa 30 % größer als bei Succinat oder 2,3-Dimethylsuccinat. Eine zuverlässige Bestimmung der Halbsättigungskonstanten für Natrium gelang nicht, da die natriumfreie Lösung wurde weder von den H2O-Oozyten noch von den Oozyten des Wildtyps toleriert wurde. Ausserdem wurde untersucht, ob das Kation Lithium für den Succinattransport Natrium als Kation ersetzten kann. Die beobachteten höheren induzierten Ströme bei den cRNS-injizierten Oozyten im Vergleich zu den Wasser-injizierten Oozyten beruhen auf eine höhere Leitfähigkeit der cRNS-injizierten Oozyten. Lithium fungiert beim fNaC3 nicht als Kation.