Generierung von Antikörper-Bibliotheken und Selektion von Antikörpern gegen die Integrine αvβ5 und α5β1 mittels Phagen-Display-Technologie

Abstract

Bei der Entstehung und für das Überleben von Tumoren spielt die Angiogenese, das heißt die Neubildung von Gefäßen, eine wesentliche Rolle. Im Zusammenwirken mit den unterschiedlichsten Wachstumsfaktoren und -mediatoren beeinflussen Integrine als Zelladhäsionsmoleküle dabei unmittelbar die Funktion und das Verhalten von Zellen. Obwohl Integrine auch in gesundem Gewebe vorkommen, weisen sie eine auffällige Häufung in Tumoren auf. Antiangiogenese in Form von Antikörper-Fragmenten, welche Integrine als Zielstruktur haben, ist daher in der Therapie von Tumoren ein wichtiger und viel versprechender Ansatzpunkt.In dieser Dissertation wurden erstmals chimäre humane/Kaninchen-Fab-Fragment-Bibliotheken gegen die Integrine αvβ5 und α5β1 generiert und spezifische Fab-Antikörper mittels Phagen-Display-Technologie selektiert. Dafür wurden zum einen das Antikörper-Repertoire immunisierter Kaninchen und zum anderen die humane Fab-DNA-Vorlage des Plasmids pAra H6HA-TT genutzt, um daraus chimäre Fab-Fragmente herzustellen. Mittels Phagen-Display-Technologie wurden in vier Runden Biopanning Antikörper-Fab-Fragmente gegen die Integrine αvβ5 und α5β1 selektiert. Jeweils sechs Fab-Klone beider Bibliotheken konnten als spezifisch und in ihrer Sequenz unterschiedlich detektiert werden.Die in dieser Arbeit isolierten Fab-Fragment-Klone stellen die Basis für den Einsatz verschiedenster Antikörperformate gegen die Integrine αvβ5 und α5β1 direkt in der Zelle dar, so dass sowohl ihre Funktion als auch deren Zusammenwirken untereinander präziser als bisher erforscht werden können. Zudem ist eine Humanisierung und damit der therapeutische Einsatz dieser Fab-Antikörper in der Zukunft möglich.