Untersuchungen zur Assoziation genetischer Polymorphismen im Gen des Endotoxinrezeptors CD14 mit der transkriptionellen Aktivität

Abstract

Assoziationen des SNPs rs2569190 im CD14-Endotoxinrezeptorgen mit dem Risiko für verschiedene Erkrankungen, die mit einer Entzündungskomponente einhergehen, und weitere in-vitro-Experimente mit transfizierten Zelllinien lassen vermuten, dass das T-Allel der polymorphen Position über eine erhöhte transkriptionelle Aktivität CD14-exprimierende Zellen für endogenes oder exogenes LPS sensibilisiert. Das Ziel der vorliegenden Arbeit bestand darin, die Assoziation des SNPs mit der CD14-Genexpressionsrate in frisch isoliertem humanen Material ex vivo zu überprüfen. Als Parameter für die transkriptionelle Aktivität des CD14-Gens wurden die CD14-mRNA-Menge in PBMC und die sCD14-Serumkonzentration herangezogen. Als Ausgangsmaterial dienten Blutproben von 42 gesunden Probanden und 42 Patienten mit chronischer Hepatitis C. Des Weiteren standen Lebergewebeproben von 41 chronisch HCV-infizierten Patienten zur Verfügung. Mithilfe der Technik ASTQ (Allel-spezifische Transkriptqua! ntifizierung) sollte herausgefunden werden, ob das CD14-Gen in Bezug auf den SNP rs2569190 Allel-spezifisch exprimiert wird (allelische Imbalanz). Obwohl T-homozygote Personen im Mittel höhere sCD14-Konzentration im Serum aufweisen, unterscheiden sich die CD14-Expression in PBMC und Leberproben als auch die sCD14-Konzentration im Serum unter den rs2569190-Genotypgruppen nicht signifikant, weder bei Gesunden noch bei Patienten mit chronischer Hepatitis C. Auf der Suche nach einem ggf. anderen, mit in-vivo-CD14-Expressionsparametern assoziierten SNP, wurden weitere SNPs im CD14-Gen mit relevanter Heterozygotie auf die Assoziation geprüft. Zunächst die signifikante Assoziation, die jedoch nach der Bonferroni-Anpassung ihre Signifikanz verlor, umfasste bei gesunden rs5744455-T-Allelträgern niedrigere sCD14-Serumkonzentrationen im Vergleich zu C-Homozygoten und bei ebenso gesunden rs2563298-T-Allelträgern erhöhte sCD14-Werte im Vergleich zu G-Homozygoten. Was die allelisch! e Expression des CD14-Gens angeht, so sind in PBMC von Gesunde! n zum gr ößten Teil nur geringe Unterschiede in der Menge der allelischen Transkriptvarianten zu beobachten (bis ± 10 %). In PBMC von rs2569190-heterozygoten Patienten mit chronischer Hepatitis C ist die allelische Expression stärker ausgeprägt und zwar zugunsten des T-Allels, aber eine gewisse allelische Imbalanz ist auch in entsprechenden rs2569190-homozygoten Kontrollen zu sehen. In Leberproben von denselben heterozygoten Patienten überwiegt mal die eine und mal die andere Alleltranskriptvariante. Die Ergebnisse liefern also zwar Hinweise auf eine allelische Imbalanz in der Expression des CD14-Gens in vivo, sie stützen aber nicht die Annahme, dass allein das T-Allel des SNPs rs2569190 eine stärkere transkriptionelle Aktivität vermittelt. Die Allel-spezifische Expression lässt sich auch nicht auf eines der Allele an den 3 anderen untersuchten polymorphen Positionen (rs5744455, rs4914, rs2563298) zurückführen. Möglicherweise wird eine allelische Imbalanz nicht nur von d! en untersuchten SNPs bestimmt, sondern auch von anderen, nicht-genetischen Faktoren. Dies würde einerseits die Eindeutigkeit der Zuordnung des T-Allels mit einer stärkeren transkriptionellen Aktivität bei zellbiologischen Experimenten mit transfizierten Zelllinien (die unter standardisierten Bedingungen durchgeführt werden) und andererseits die Unterschiede bei ex vivo gewonnenem Material erklären.