Durch Sirolimus induzierte frühe Veränderungen des Proteoms und Phosphoproteoms in humanen T-Lymphoblasten

Abstract

Ziele: Die vorliegende Studie wurde unternommen, um die frühen Veränderungen des Proteoms und Phosphoproteoms während einer durch Sirolimus (SRL) induzierten Inhibition der Lymphozytenproliferation zu untersuchen. Materialien und Methoden: Die Proliferationstests wurden mit humanen CCRF-CEM T-Lymphoblasten unter verschiedenen SRL-Konzentrationen durchgeführt. Das Gesamtprotein der Zelllysate nach einer SRL-Behandlung wurde verwendet, um signifikant veränderte Proteine und phosphorylierte Proteine in 2DE-Gelen unterscheiden und mittels einem Q-TOF Ultima Global Massenspektrometer identifizieren zu können. Ergebnisse und Diskussion: Die Inkubation mit 2,5 µmol/l SRL führte zu einer annähernd 70%igen Inhibition der Zellproliferation. Die für 30 Minuten mit 2,5 µmol/l SRL inkubierten Zellen zeigten ein differentielles Phosphorylierungsmuster mit einem vermehrt (TCPQ) und sechs vermindert phosphorylierten Proteinen (TBA1B, VIME, HNRPD, ENPL, SEPT9, PLSL). Die Untersuch! ung der differentiellen Proteinexpression zeigte fünf vermehrt (ECHB, PSB3, MTDC, LDHB, NDKA) und vier vermindert (EHD1, AATC, LMNB1, MDHC) exprimierte Proteine. Neun dieser unterschiedlich regulierten Proteine/Phosphoproteine (TCPQ, TBA1B, VIME, HNRPD, ENPL, ECHB, PSB3, LDHB, LMNB1) stellten sich über das Bindeprotein YWHAZ als potentielle Interaktionspartner bei der Auswertung mittels der Software MINT dar. Schlussfolgerungen: In dieser Arbeit wird erstmals der simultane Einfluss von SRL auf den Phosphorylierungsstatus und die Proteinexpression im Gesamtproteom von CCRF-CEM-Zellen beschrieben. Von den sechzehn identifizierten signifikant veränderten Proteinen konnte zwischen neun dieser Proteine und dem mTOR-Komplex eine Beziehung über das Bindungsprotein YWHAZ aus der Gruppe der 14-3-3-Proteine gezeigt werden.