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Funktionelle Analyse des Prostate-derived-Ets-Factors (PDEF) in der Prostatakarzinomzelllinie LNCaP

dc.contributor.advisorThelen, Paul PD Dr.de
dc.contributor.authorSchulz, Karoline Annade
dc.date.accessioned2012-04-16T17:25:17Zde
dc.date.available2013-01-30T23:50:25Zde
dc.date.issued2011-05-09de
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B1E1-4de
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-996
dc.description.abstractPDEF, ein Koregulator des Androgenrezeptors, zeigt eine deutlich tumorassoziierte Expression. Seine Rolle in der Tumorzellinvasion wird derzeit kontrovers diskutiert. Um die Funktion von PDEF im Prostatakarzinom zu untersuchen, wurde seine Expression in verschiedenen nicht-malignen und malignen Prostatazelllinien ermittelt. Des Weiteren wurden die Effekte der PDEF-Herunterregulierung mittels RNA-Interferenz in der androgensensiblen Prostatakarzinomzelllinie LNCaP analysiert. LNCaP-Zellen wurden mit siRNA gegen PDEF transfiziert. Als Kontrolle diente siRNA gegen das im Menschen nicht vorkommende Luciferasegen (LUC). Die Zellproliferation wurde mit dem BrdU-Assay ermittelt und der Bestimmung der Zellvitalität diente ein AlamarBlue -Assay. Die Genexpression wurde mittels Real-Time-RT-PCR quantifiziert. Die PDEF-mRNA-Expression war in den benignen immortalisierten Prostatazellen (BPH-1, PNT2, RwPE-1) über 1000-fach niedriger im Vergleich mit den Prostatakarzinomzelllinien (LNCaP, VCaP, PC-3). Durch die Transfektion mit spezifischer siRNA konnte die PDEF-Expression in den LNCaP-Zellen bis auf 20% herunterreguliert werden, während die siLUC-Transfektion keinen vergleichbaren Effekt hatte. Nach Herunterregulierung von PDEF zeigte sich eine deutliche Verminderung der Zellproliferation, einhergehend mit signifikant verringerter Expression verschiedener Prostatakarzinom-relevanter Gene: Androgenrezeptor, PSA, IGF-1, IGF-2, IGF-1-Rezeptor und der aktuell etablierte Marker PCA3. Im Gegensatz zu diesen Genen war die IGFBP-3-Expression mehr als 2-fach hochreguliert. Die Herunterregulierung von PDEF macht eine Funktion des Gens in Tumorzellproliferation und Apoptose deutlich. Eine siRNA-vermittelte Abnahme der Zellproliferation ging mit entsprechender Expression von Genen der Androgenrezeptor- und der IGF-Rezeptor-Achse einher. Die Expression von Genen mit antiproliferativen und proapoptotischen Effekten wie IGFBP-3 wurde hochreguliert. Darüber hinaus ist die PDEF-Expression in Prostatakarzinomzellen im Gegensatz zu beni gnen Prostatazellen deutlich mit einem malignen Phänotyp assoziiert. Demzufolge ist PDEF ein Marker für das Prostatakarzinom, der eine deutliche Tumorassoziation und eine entscheidende Funktion in der Tumorprogression zeigt.de
dc.format.mimetypeapplication/pdfde
dc.language.isogerde
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/de
dc.titleFunktionelle Analyse des Prostate-derived-Ets-Factors (PDEF) in der Prostatakarzinomzelllinie LNCaPde
dc.typedoctoralThesisde
dc.title.translatedFunctional Analysis of the Prostate-derived-Ets-Factor (PDEF) in prostate cancer cells LNCaPde
dc.contributor.refereeThelen, Paul PD Dr.de
dc.date.examination2011-05-16de
dc.subject.dnb610 Medizin, Gesundheitde
dc.description.abstractengPDEF a co-regulator of the androgen receptor shows a marked tumour-associated expression. The role of PDEF in cancer cell invasiveness is currently under investigation. To study the function of PDEF in prostate cancer cells we analyzed the expression in various non-malignant and cancerous prostate cell lines. Furthermore, we investigated the effects of PDEF knock-down by RNA interference in androgen-sensitive LNCaP prostate cancer cells. LNCaP cells were transfected with siRNA against PDEF. As a control we used siRNA targeting the non-human luciferase gene (LUC). Cell proliferation was assessed by BrdU-assays and cell viability was measured by an AlamarBlue -assay. Gene expression was quantitated by real time RT-PCR. mRNA expression of PDEF was over 1000-fold lower in immortalized normal prostate cells (BPH-1, PNT2, RwPE-1) as compared with prostate cancer cells (LNCaP, VCaP, PC-3). PDEF expression in cancer cells could be knocked-down to 20% by specific siRNA but was unaltered after siLUC transfection. PDEF knock-down in LNCaP cells elicited a marked decrease of tumour cell proliferation concomitant with significant down-regulation of expression for genes highly relevant for prostate cancer: The androgen receptor, PSA, IGF-1, IGF-2, IGF-1 receptor and the new marker PCA3. In contrast to these genes IGFBP-3 expression increased more than two-fold after PDEF knock-down. PDEF knock-down revealed a role of this gene in tumour cell proliferation and apoptosis. A siRNA-mediated decrease of cell proliferation was associated with accordant expression of genes from the androgen receptor-axis and the IGF receptor-axis. However, the expression of genes with anti-proliferative or proapoptotic roles was up-regulated e.g. IGFBP-3. Thus, in prostate cancer in contrast to non-cancerous cells PDEF expression is highly associated with a malignant phenotype of the disease. Therefore PDEF is a marker for prostate cancer showing a strong tumour association and a pivotal function in tumour progression.de
dc.contributor.coRefereeJarry, Hubertus Prof. Dr.de
dc.contributor.thirdRefereeVirsik-Köpp, Patricia Prof. Dr.de
dc.subject.topicMedicinede
dc.subject.gerProstatakarzinom PDEFde
dc.subject.gerAndrogenrezeptorde
dc.subject.gerLNCaP-Zellende
dc.subject.engprostate cancer PDEFde
dc.subject.engandrogen receptorde
dc.subject.engLNCaP cellsde
dc.subject.bk44.88de
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:7-webdoc-2953-3de
dc.identifier.purlwebdoc-2953de
dc.affiliation.instituteMedizinische Fakultätde
dc.subject.gokfullMED 283: Molekularbiologie {Medizin}de
dc.subject.gokfullMED 471: Urologiede
dc.identifier.ppn666361312de


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