Establishment of a novel technique to study G protein-coupled receptor activation

Djannatian, Minou Susan

dc.contributor.advisor	Rossner, Moritz PD Dr.	de
dc.contributor.author	Djannatian, Minou Susan	de
dc.date.accessioned	2012-04-16T17:26:13Z	de
dc.date.available	2013-01-30T23:50:44Z	de
dc.date.issued	2011-08-17	de
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B222-C	de
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1060
dc.description.abstract	G-Protein-gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) erfüllen vielfältige Funktionen in der Zelle und spielen eine große Rolle in der Medikamentenentwicklung. Die durch GPCRs vermittelten Signalprozesse sind wesentlich vom zellulären Kontext abhängig. Aus diesem Grund kann die Anwendung von GPCR-Aktivierungsassays in verschiedenen Zelltypen zum Verständnis von GPCR-Funktionen sowie bisher unbekannter Substanzwirkungen beitragen. Es wurde ein sog. Split-TEV-Assay entwickelt, bei dem die stimulationsabhängige Interaktion von β-arrestin 2 mit GPCRs als Korrelat für die GPCR-Aktivierung verwendet wurde. Dabei wurden inaktive N- und C-terminale Fragmente der TEV-Protease an den GPCR bzw. an β-arrestin 2 gekoppelt. Dabei führt die Interaktion der beiden Fusionsproteine zur Rekomplementierung der TEV-Protease und nachfolgender Abspaltung eines Transkriptionsfaktors sowie Reportergenaktivierung. Split-TEV-Assays für GPCR-Aktivierung sind in transient transfizierten Zellen ein sensitives Messinstrument und können in verschiedenen heterologen Zelllinien, aber auch in primären Zellen angewendet werden. Die Funktion der Assays ist deutlich von den endogenen Eigenschaften der verwendeten Zelltypen abhängig. Durch die hohe Sensitivität und Flexibilität sind Split-TEV-Assays ein wertvolles Werkzeug, um GPCR-Aktivierung in verschiedenen Zelltypen schnell und kosteneffektiv zu analysieren.	de
dc.format.mimetype	application/pdf	de
dc.language.iso	eng	de
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/	de
dc.title	Establishment of a novel technique to study G protein-coupled receptor activation	de
dc.type	doctoralThesis	de
dc.title.translated	Entwicklung einer neuen Technik zur Analyse der Aktivierung G-Protein-gekoppelter Rezeptoren	de
dc.contributor.referee	Simons, Mikael Prof. Dr.	de
dc.date.examination	2011-08-17	de
dc.subject.dnb	610 Medizin, Gesundheit	de
dc.description.abstracteng	G protein-coupled receptors (GPCRs) constitute the largest receptor family in mammals and represent important drug targets. Signaling through GPCRs mediates physiological effects that are strongly dependent on the cellular context. Therefore, the availability of assays monitoring GPCR activation applicable in different cell types could help to better understand GPCR functions and to realize the potential of known substances as well as novel ones. Here, we introduce a split-TEV (tobacco etch virus) assay to monitor GPCR activation through the stimulation-dependent recruitment of β-arrestin 2. Inactive N- and C-terminal fragments of the TEV protease are coupled to a GPCR and β-arrestin 2, respectively. Ligand-dependent interaction of the two fusion proteins leads to functional complementation of the TEV protease, followed by the cleavage of an artificial transcription factor and successive reporter gene activation. The presented split-TEV assay system is highly sensitive and was successfully applied in heterologous cell lines as well as in primary cultured neuronal and glial cells. We show that assay performance strongly depends on the endogenous properties of different cell types. The sensitivity and flexibility make split-TEV assays a valuable tool to analyze GPCR activation in different cell types in a rapid and cost-effective way.	de
dc.contributor.coReferee	Zimmermann, Wolfram-Hubertus Prof. Dr.	de
dc.contributor.thirdReferee	Schwappach, Blanche Prof. Dr.	de
dc.subject.topic	Medicine	de
dc.subject.ger	Signaltransduktion	de
dc.subject.ger	Split-TEV	de
dc.subject.ger	zellbasierter GPCR-Assay	de
dc.subject.ger	β-Arrestin	de
dc.subject.ger	Luciferase	de
dc.subject.ger	primäre Zellen	de
dc.subject.eng	signal transduction	de
dc.subject.eng	Split-TEV	de
dc.subject.eng	Cell-based GPCR assay	de
dc.subject.eng	β-Arrestin	de
dc.subject.eng	Luciferase	de
dc.subject.eng	Primary cells	de
dc.subject.bk	44.03	de
dc.identifier.urn	urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-3104-7	de
dc.identifier.purl	webdoc-3104	de
dc.affiliation.institute	Medizinische Fakultät	de
dc.subject.gokfull	MED 000: Medizin	de
dc.identifier.ppn	668125055	de

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Human- und Zahnmedizin [2870]

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