dc.contributor.advisor | Pieler, Tomas Prof. Dr. | de |
dc.contributor.author | Spieler, Derek | de |
dc.date.accessioned | 2012-04-16T17:27:28Z | de |
dc.date.available | 2013-01-30T23:50:51Z | de |
dc.date.issued | 2002-12-09 | de |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B325-D | de |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1204 | |
dc.description.abstract | Die Mitglieder der ANF-Homöobox-Genfamilie gehören zu den frühesten Markern für das anteriore zentrale Nervensystem im Wirbeltierembryo. Bei einem Verlust ihrer Genaktivität in der Maus fallen morphologische Veränderungen im Bereich der Mittellinie des Gehirns auf (Septum pellucidum, kommissurale Axone und Hypophyse). Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit Aspekten der Transkription der ANF-Homöobox-Gene. Im Mittelpunkt steht die Untersuchung des Promotors des orthologen Genes des Huhnes, GANF. Die GANF-Promotor-Region wurde im Rahmen dieser Arbeit auf 600 bp eingegrenzt, die ausreichend sind, um die Expression im Hühnerembryo zu kontrollieren. Diese Region ist konserviert in Maus, Mensch, Huhn und Frosch. Es konnte ferner gezeigt werden, dass dieser Bereich ebenfalls im Zebrafisch für die Steuerung der Expression ausreicht, nicht aber im Mausembryo. Dies korrespondiert mit bereits gefundenen Unterschieden zwischen GANF bzw. DANF auf der einen Seite und Hesx1 auf der anderen in Bezug auf die zusätzliche Expressionsdomäne von Hesx1 im anterioren viszeralen Endoderm (AVE) bzw. unterschiedliche Mechanismen der Induktion anteriorer neuraler Strukturen im Huhn bzw. Zebrafisch und den Säugetieren. Mit dem Ziel, Interaktionspartner des GANF-Promotors zu finden, wurden Bindungsstellen aus dem gefundenen Promotorbereich näher untersucht. Für eine Bindestelle von Pax6 und zwei Bindestellen von Otx2 konnten sowohl die Bindungen als auch eine signifikant reduzierte Bindung an ein entsprechend mutiertes Oligonukleotid gezeigt werden. Für eine potenzielle Bindungssequenz von GANF konnte diese Spezifität nicht gezeigt werden. Um die Reporterkonstrukte gemäß der frühen Expression von GANF auch in sehr jungen Embryonen zu untersuchen, wurde eine neue Elektroporationsvariante entwickelt und im Labor etabliert, die es im Gegensatz zur In-ovo-Elektroporation von Hühnerembryonen erlaubt, sehr junge Embryonen (HH4 -HH 14) mit hoher Effizienz zu elektroporieren. Im Rahmen dieser Arbeit wurde eine Untersuchung von an Septo-optischer Dysplasie (SOD) erkrankten Patienten der Universitätsklinik Göttingen auf Mutationen im menschlichen GANF-Ortholog HESX1 begonnnen. HESX1 ist an dem Zustandekommen der SOD beteiligt. Bei der Sequenzierung der DNA von bis jetzt einem Patienten wurden weder eine bekannte noch eine neue Mutation gefunden. Als Grund hierfür kommt eine mögliche genetische Heterogenität oder ein Funktionsverlust in einem noch nicht bekannten Enhancer in Frage. | de |
dc.format.mimetype | application/pdf | de |
dc.language.iso | ger | de |
dc.rights.uri | http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm | de |
dc.title | Molekulare Analyse eines Homöobox-Gen-Promotors in der Gehirnanlage von Wirbeltierembryonen | de |
dc.type | doctoralThesis | de |
dc.title.translated | Molecular analysis of a homeobox gene promotor in the prospective forebrain of vertebrates | de |
dc.contributor.referee | Pieler, Tomas Prof. Dr. | de |
dc.date.examination | 2005-04-07 | de |
dc.subject.dnb | 610 Medizin, Gesundheit | de |
dc.description.abstracteng | The ANF homeobox genes belong to the earliest group of genes expressed in the vertebrate anterior central nervous system. Targeted disruption of the murine ortholog Hesx1 reveals morphological defects in homozygous embryos affecting midline structures of the brain to a variable severity (e.g. reduction of the amount of prospective forebrain tissue, missing septum pellucidum, aberrant morphogenesis of Rathke's pouch, microphthalmia). This thesis deals with aspects of the transcription of the ANF homeobox gene family. It focuses on the study of the promotor of the chicken ortholog, called GANF. Using lacZ reporter constructs the GANF promotor region was delimited to a 600 bp DNA fragment that is sufficient for driving the expression in the chicken embryo. This region is conserved in mouse, human, frog and chicken and is capable of driving the expression also in zebrafish. Despite this conservation, this promotor construct is not capable of driving the expression in mice. This corresponds with known differences between GANF and DANF on the one hand and Hesx1 on the other hand, regarding the additional murine expression domain of Hesx1 in the anterior visceral endoderm (AVE), and the distinct mechanisms of the induction anterior neural structure in the chick, zebrafish and mammals. In order to find GANF promotor's interaction partners, binding sites found in the conserved region were investigated. One pax6 binding site and two otx2 binding sites were found and proved both by pax6 and otx2 antibody respectively and mutated oligonucleotides. For a potential GANF binding site no specific binding could be shown. In order to investigate the expression of the reporterconstructs according to the early endogenous GANF expression domain, a new variation of electroporation was developed and established in the lab which allows electroporation of young chicken embryos (HH4-HH10) in a very efficient and fast manner. Within this framework I investigated in collaboration with the department of neuroopththalmology and neuropediatrics at the University of Göttingen the human GANF ortholog HESX1 in patients suffering from septo-optic dysplasia (SOD). It has previously been shown that mutations in HESX1 have been implicated in the aetilogy of SOD. In the one patient examined so far, no gene mutation has been found. Genetic heterogenity or an unknown, distant and non-working enhancer may be an explanation. This investigation will be continued and may be helpful in understanding some additional aspects of the molecular nature of this developmental disorder. | de |
dc.contributor.coReferee | Viebahn, Christoph Prof. Dr. | de |
dc.subject.topic | Medicine | de |
dc.subject.ger | Promotoranalyse | de |
dc.subject.ger | Homöobox-Gen | de |
dc.subject.ger | Huhn | de |
dc.subject.ger | Maus | de |
dc.subject.ger | Zebrafisch | de |
dc.subject.ger | GANF/HESX1 | de |
dc.subject.ger | Otx2 | de |
dc.subject.ger | Pax6 | de |
dc.subject.ger | Gehirnanlage des Prosenzephalons | de |
dc.subject.ger | Elektroporation | de |
dc.subject.ger | Septo-optische Dysplasie (SOD) | de |
dc.subject.eng | promotoranalysis | de |
dc.subject.eng | chicken | de |
dc.subject.eng | mouse | de |
dc.subject.eng | zebrafish | de |
dc.subject.eng | GANF/HESX1 | de |
dc.subject.eng | Otx2 | de |
dc.subject.eng | Pax6 | de |
dc.subject.eng | prospective forebrain | de |
dc.subject.eng | electroporation | de |
dc.subject.eng | septo-optic dysplasia (SOD) | de |
dc.subject.bk | 44.36 und 44.48 | de |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-550-0 | de |
dc.identifier.purl | webdoc-550 | de |
dc.affiliation.institute | Medizinische Fakultät | de |
dc.subject.gokfull | M und W | de |
dc.identifier.ppn | 508970962 | de |