Charakterisierung von Astrozyten im respiratorischen Netzwerk
Characterization of astrocytes in the respiratory network
von Dennis Graß
Datum der mündl. Prüfung:2006-07-13
Erschienen:2005-12-09
Betreuer:PD Dr. Swen Hülsmann
Gutachter:PD Dr. Swen Hülsmann
Gutachter:Prof. Dr. Kerstin Riegelstein
Dateien
Name:grass.pdf
Size:8.62Mb
Format:PDF
Description:Dissertation
Zusammenfassung
Englisch
In the respiratory network in the caudal medulla oblongata a group of neurons generates a rhythmic activity which drives the respiratory muscles. The synaptic transmission and the neuronal interactions in this network are well examined while the role of glial cells remains still not clear. In this work, fluorescent astrocytes in the ventral respiratory group and in the nucleus of the hypoglossal nerve in freshly isolated brainstem slices from TgN(hGFAP-EGFP) mice were analyzed with the whole-cell voltage-clamp-technique. Three distinct cell populations could be distinguished by different membrane current patterns. A first group showed symmetric, not rectifying membrane currents and a significant inward current after application of the glutamate-transporter agonist d-aspartate. A second group of cells showed similar properties but expressed an additionally outward current, which could be identified as an a-type K+-current. A third group, immunohistochemical marked by antibodies against the glial progenitor cell marker NG2 was characterized by outwardly rectifying K+-currents, significantly smaller inward currents and D-aspartate-induced transporter-currents. Astrocytes of all three groups showed kainate-induced ionotropic glutamate-receptor currents. Astrocytes of the first and second group appeared as mature astrocytes. They are connected via gap-junction forming a syncytium, which is able to regulate extracellular K+- and glutamate concentration and thereby could stabilize the neuronal network activity. In contrast, the third group of astrocytes showed properties characteristically for early differentiation stages of glial and neuronal cells. These cells could be observed in different regions of the brain and also in adult animals. Because of their contacts to astrocytes, neurons, blood vessels and the forming of glutamatergic synaptically structures these cells might be able to measure neuronal activity and maybe are partially responsible for pre- und postnatal plasticity in the respiratory network.
Keywords: astrocyte; NG2; brainstem; respiratory network; glutamate; syncytium; spatial potassium buffering; synantocytes; hypoglossus; glia; a-type potassium current
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Im respiratorischen Netzwerk in der kaudalen Medulla oblongata generiert eine Gruppe von Neuronen eine rhythmische Aktivität, die die Atembewegungen steuert. Die synaptische Transmission sowie das neuronale Zusammenspiel in diesem Netzwerk ist mittlerweile gut erforscht, die Rolle der Gliazellen in diesem Netzwerk ist jedoch weitestgehend unklar. In der ventralen respiratorischen Gruppe und im Kerngebiet des N. hypoglossus in frisch isolierten Hirnstammschnitten aus TgN(hGFAP-EGFP)-Mäusen wurden fluoreszierende Astrozyten mit der Whole-Cell-Voltage-Clamp-Technik analysiert. Anhand unterschiedlicher Membranströme konnten drei Subpopulationen unterschieden werden. Eine Gruppe zeigte symmetrische, nicht gleichrichtende Membranströme und einen deutlichen Einwärtsstrom nach Applikation des Glutamat-Transporter-Agonisten D-Aspartat. Eine zweite Gruppe ähnelte diesen Zellen, wies jedoch einen zusätzlichen auswärts gerichteten spannungsgesteuerten A-Typ-K+-Strom auf. Eine dritte Gruppe, immunhistochemisch markierbar mit Antikörpern gegen den glialen Vorläuferzell-Marker NG2, wurde durch auswärts gleichrichtende K+-Ströme, deutlich geringere Einwärtsströme und geringe D-Aspartat-induzierte Transporter-Ströme charakterisiert. Astrozyten aller drei Gruppen zeigten durch Kainat induzierte ionotrope Glutamat-Rezeptorströme. Astrozyten der ersten und zweiten Gruppe zeigten sich als reife Astrozyten, die im respiratorischen Netzwerk ein über Gap-junctions gekoppeltes Synzytium bilden. Dies ist in der Lage, die extrazelluläre K+- und Glutamatkonzentration zu regulieren und damit die neuronale Netzwerkaktivität zu stabilisieren. Die dritte Gruppe von Astrozyten zeigt dagegen charakteristische Merkmale für frühe Differenzierungsstufen von glialen und neuronalen Zellen. Diese Zellen konnten allerdings in verschiedenen Hirnregionen und auch in adulten Tieren beobachtet werden. Aufgrund ihres Kontaktes zu Astrozyten, Neuronen, Blutgefäßen sowie der Ausbildung von glutamatergen synapsenähnlichen Strukturen könnten diese Zellen in der Lage sein, neuronale Aktivität zu messen und einen Anteil an der prä- und postnatalen Plastizität des respiratorischen Netzwerks zu haben.
Schlagwörter: Astrozyt; NG2; Hirnstamm; respiratorisches Netzwerk; Glutamat; Synzytium; Kalium-Puffer; Synantozyten; Hypoglossus; Glia; A-Typ-Kalium-Strom