dc.contributor.advisor | Schu, Peter Prof. Dr. | de |
dc.contributor.author | Radhakrishnan, Karthikeyan | de |
dc.date.accessioned | 2012-05-16T12:09:00Z | de |
dc.date.available | 2013-01-30T23:50:30Z | de |
dc.date.issued | 2007-02-07 | de |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B619-B | de |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1299 | |
dc.description.abstract | Der Adaptor-Protein Komplex 1 (AP-1) vermittelt die
Bildung von transportvesikeln am trans-Golgi Netzwerk und ist
Bestandteil Clathrin umhüllter transportvesikel. AP-1
vermittelt die Clathrin Bindung an Vesikel und bindet
zudem an Sequenzmotive in zytoplasmatischen Domänen von
transmembranproteinen. Seine Funktion wird in der
Sortierung von Proteinen in Clathrin-transportvesikel
gesehen. Der AP-1 Komplex besteht aus 4 Untereinheiten,
deren Funktionen für die Proteinsortierung und die
Vesikelbildung nur in Teilen verstanden sind. Die
beiden grossen Untereinheiten γ1 und β1 bestehen
jeweils aus einer N-terminalen globulären Domäne und
einer C-terminalen globulären Domäne, die eine Vielzahl
von Proteinen binden, deren Funktionen bei der
Vesikelbildung nicht verstanden sind. Die μ1A
Untereinheit des Komplexes ist essentiel für die
Membranbindung des AP-1 und bindet
transmembranproteine, die durch den AP-1 Komplex
transportiert werden. Mit Ausnahme des β 1 Adaptin
existieren von allen Untereinheiten des AP-1 Isoformen,
von denen die Mehrzahl gewebsspezifisch expremiert
werden. Die Funktionsanalyse von μ2/μ1A-Adaptin
Chimären zeigte, dass der Bereich geringster
Sequenzhomologie eine Bedeutung für die AP-1
vermittelte Proteinsortierung hat. Die Membranbindung
des AP-1 Komplexes mit dem μ2/μ1A Chimären ist
stabiler. Mittels des Y2H Verfahrens wurde ein bislang
nicht charakterisiertes Protein identifiziert, das mit
hoher Affinität und Spezifität an diese Domäne bindet.
Seine Überexpression führt zu einer verminderten
Membranbindung des AP-1, nicht des chimären Komplexes.
Vom σ1-Adaptin existieren drei Isoformen σ1A, σB und
σC. Das σ1B transskript wird zudem gewebsspezifisch
alternativ gespleisst. Es sollten spezifische
Funktionen für σ1 Isoformen identifiziert werden. Da
ein γ1 Adaptin Bindemotif in der Isoform σ1B-3
existiert, nicht aber in den anderen, wurde dieses
Motif analysiert. Es interagierte nicht mit γ1, jedoch
lies sich durch Änderung einer einzigen flankierenden
Aminosäure, eine Bindung erreichen.Es wurde die Sortierung des Sortilin Rezeptors in
μ1A-sowie σ1B Adaptin-defizienten Zellen untersucht. In
μ1A -/- zellen ist Sortilin von seiner normalen
trans-Golgi Netzwerk
Lokalisation in frühe Endosomen umverteilt. Daraufhin
wurde die Bindung zweier Sortierungsmotife des Sortilin
überprüft. Das Tyrosin-basierende Motif zeigte eine
Interaktion mit dem μ1A Adaptin. Das
di-Leucin-basierende Motif zeigte die höchste Affinität
zu γ1/σ1B Hemikomplexen. Embryonale Fibroblasten einer
σ1B "knock-out" Maus zeigten jedoch keine
Sortilinfehlsortierung. Die Interaktion des Sortilins
mit μ1A Adaptin scheint daher für eine Sortierung
zwischen dem trans-Golgi
Netzwerk und Endosomen in diesen Zellen ausreichend zu
sein. Adipocyten von σ1B-defizienten Mäusen hatten
jedoch eine vierfach höhere Menge an Sortilin.
σ1B-Adaptin vermittelt daher in Adipocyten die
Sortierung entlang eines gewebsspezifischen
transportweges. | de |
dc.format.mimetype | application/pdf | de |
dc.language.iso | eng | de |
dc.rights.uri | http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyr_diss.html | de |
dc.title | Studies on AP-1 Sorting Function and Regulation of Membrane Binding | de |
dc.type | doctoralThesis | de |
dc.contributor.referee | Figura, Kurt von Prof. Dr. Dr. h.c. | de |
dc.date.examination | 2007-01-16 | de |
dc.subject.dnb | 500 Naturwissenschaften allgemein | de |
dc.description.abstracteng | The Adaptor-Protein complex (AP-1) mediates the
formation of transport vesicles at the trans-Golgi network and is a component
of Clathrin Coated Vesicles. Besides facilitating the
binding of clathrin to vesicles, AP-1 also binds the
sorting signal motif present in the cytoplasmic domains
of transmembrane proteins and thereby functions to sort
proteins into transport vesicles. The AP-1 complex
consists of 4 subunits, whose functions in the protein
sorting and the vesicle formation are only partially
understood. Both the large subunits γ1 and β1 consist
of, a N-terminal globular domain and a C-terminal
globular domain, which bind a μltiplicity of proteins,
whose functions in vesicle formation are not known. The
μ1A subunit of the complex is essential for the
membrane binding of the AP-1 and binds transmembrane
proteins, which are transported by the AP-1 complex.
With the exception of β1-adaptin, isoforms exist from
all subunits of the AP-1, which show tissue specific
expression. The functional analysis of a μ2/μ1A-adaptin
chimera showed that the domain of μ1A, exhibiting the
least sequence homology, has a role in the AP-1
mediated protein sorting. The membrane binding of the
AP-1 complex containing the μ2/μ1A chimera, is more
stable. Using Y2H method, an uncharacterized protein
was identified, which binds with high affinity and
specificity to this domain. Its over-expression leads
to a decreased membrane binding of the AP-1, but not of
the chimeric complex. Three isoforms are found for the
σ1-adaptin viz., σ1A, σB and σC, whose functions are
not known. Further, the σ1B transcript shows tissue
specific alternative splicing. Since a γ1-adaptin
binding motif is present in the isoform σ1B-3, this
motif was analyzed. It did not interact with γ1,
however, interaction was observed by changing only one
flanking aminoacid.The sorting of the Sortilin receptor was examined in
μ1A-deficient and also in σ1B-adaptin deficient cells.
In μ1A -/- cells, sortilin is mislocalized from its
normal trans-Golgi network
localization to early Endosomes. Thereupon, the role of
two sorting motifs of sortilin was examined. The
Tyrosine-based Motif showed an interaction with the
μ1A-adaptin. The di-Leucine based Motif showed the
highest affinity for γ1/σ1B hemi-complex. However,
embryonic fibroblasts of σ1B "knock out" mouse showed
no mis-sorting of sortilin. The interaction of sortilin
with μ1A-adaptin, therefore seems to be sufficient for
sorting between the trans-Golgi network and endosomes in
these cells. Adipocytes of σ1B deficient mice had
however a fourfold higher quantity of sortilin. In
adipocytes, the σ1B-adaptin might be involved in a
tissue specific transport pathway. | de |
dc.contributor.coReferee | Fritz, Hans-Joachim Prof. Dr. | de |
dc.subject.topic | Mathematics and Computer Science | de |
dc.subject.ger | AP-1 | de |
dc.subject.ger | zyklisieren | de |
dc.subject.ger | Sortieren | de |
dc.subject.eng | AP-1 | de |
dc.subject.eng | Recycling | de |
dc.subject.eng | Sorting | de |
dc.subject.bk | 42.15 Zellbiologie | de |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-1414-8 | de |
dc.identifier.purl | webdoc-1414 | de |
dc.affiliation.institute | Medizinische Fakultät | de |
dc.subject.gokfull | WHC 500: Organellen, Zellorganellen {Cytologie} | de |
dc.identifier.ppn | 579211053 | de |