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dc.contributor.advisor Jansen, Stephan PD Dr. de
dc.contributor.author Bull, Leonard de
dc.date.accessioned 2012-05-16T12:09:39Z de
dc.date.available 2013-01-30T23:50:26Z de
dc.date.issued 2004-03-04 de
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B63B-0 de
dc.description.abstract Während der Frühphase der Befruchtung interagieren die Eizelle und das Spermatozoon in komplexer Weise. Die männlichen und weiblichen Gameten müssen sich erkennen, aneinander binden und Signale austauchen, die eine ganze Reihe von biochemischen Reaktionen nach sich ziehen und letztendlich zur Fusion führen. Diese Interaktionen werden von spezialisierten Mölekülen übernommen, die auf den Oberflächen sowie auf den Membranen der Gameten lokalisiert sind. In dieser Arbeit wurde das 95 kDa Spermadhäsionsprotein in Sus scrofa characterisiert.Mittels detaillierter Northern- und RT-PCR Analysen wurde die Expression der 95 kDa Spermadhäsionprotein in 6 verschiedenen Geweben untersucht. Es konnte gezeigt werden, dass das Protein ausschließlich in den testicular Keimzellen exprimiert wird, während der postmeiotitischen Phase.Um die phylogenetische Evolution des 95 kDa Spermadhäsionsproteins besser zu verstehen und seine Funktion nachzuvollziehen, wurde mit Hilfe der Animosäurensequenz ein phylogenetischer Stammbaum der konservativen katalytischen Domäne erstellt. Dreizehn bereits charakterisierte Proteinkinasen wurden hinzugezogen.Außerdem bestätigten Ergebnisse aus dem Homologieergleich der Nukleotidsequenzen, dass das 95 kDa Spermadhäsionsprotein zur Gruppe der Tyrosin-Rezeptorkinasen gehört. Die Untersuchungen zeigten die wesentlichen Merkmale dieser Proteingruppe, wie die stark konservierten kurzsträngigen Aminosäuren, Vorhandensein von Phosphotyrosinreste und einem einmal durchquerenden Transmembranprotein mit zwei funktionalen Bindungsstellen. An der extrazellulären Stelle bindet spezifisch ZP3, während die intrazelluläre Stelle enzymatische Tyrosinkinase aktivitäten zeigt, die bei der Bindung von ZP3 aktiviert werden. Dieses Wissen dient als Grundlage für das Verständnis der Rolle des Spermadhäsionsproteins in der Frühphase der Befruchtung.Ausserdem wurden, um die Genomstruktur des 95 kDa Gens zu analysieren, Primern aus humaner 95 kDa mRNA zur Screenen porcine Genombibliotheken hergeleitet. Ein positiver PAC-Klon wurde isoliert und anschließend sequenziert. Das 95 kDa Gen besteht aus sieben exons, wobei exon sech die gesamte in Säugetieren stark konservierten katalytische Domäne überspannt. Die Screenen der somatic- and radiation hybrid panels katiert das Gen dem Chromosom 3q11-12. Dies wurde durch FISH-Analysen bestätigt. Es wurde jedoch keine Syntenie zwischen der q arme der Chromosome HSA und SSC festgestellt.Die Ergebnisse dieser Arbeit bestätigten die Klassifikation des 95 kDa Spermadhäsionsproteins und lieferten neue Erkenntnisse über ihre Funktion, Genomstruktur und chromosomale Lokalisation. de
dc.format.mimetype application/pdf de
dc.language.iso eng de
dc.rights.uri http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm de
dc.title Characterization of the 95 kDa sperm adhesion protein de
dc.type doctoralThesis de
dc.title.translated Charakterizierung des 95 kDa Spermienadhäsionsproteins de
dc.contributor.referee Fritz, Hans-Joachim Prof. Dr. de
dc.date.examination 2004-01-22 de
dc.description.abstracteng During the early stages of fertilisation, the interaction between the spermatozoa and the oocyte involves complex mechanism. The events of gamete recognition and binding triggers signal transduction which initiates biochemical pathways leading to fusion. This interaction is mediated by a plethora from molecules located at the cell surface and in the plasma membrane. In this work, the 95 kDa sperm adhesion receptor protein was characterized in Sus scrofa.By means of Northern- and RT-PCR assays the expression of the 95 kDa sperm adhesion protein was examined in 6 different porcine tissues. It was found that the protein is exclusively expressed in the testicular cells at the postmeiotitic phase of development.In order to understand the evolution and predict the function of the 95 kDa sperm adhesion protein a phylogenetic tree (rooted tree) using the amino acid sequence of the conserved catalytic domain was plotted. Thirteen already characterized protein kinase were included in the tree.In addition, information obtained from the alignment of nucleotide sequences, confirmed the classification of the 95 kDa sperm adhesion protein to the tyrosine kinase receptor family.These results revealed the characteristic features of the family, which are highly conserved short-stretches of amino acids, presence of phosphotyrosine residues, and a single pass transmembrane protein with two functional sites. The extracellular site specifically binds ZP3 while the intracellular has tyrosine kinase enzymatic activity, which is stimulated when the protein binds ZP3. This knowledge serves as a major first step towards the understanding of the role of the sperm adhesion protein during the early stages of fertilization.Furthermore, to analyse the genomic structure of the 95 kDa gene, primers derived from human 95 kDa mRNA were designed to screen porcine genomic libraries. A positive PAC clone was isolated and the gene sequenced. The 95 kDa gene consists of 7 exons with exon 6 spanning the entire catalytic domain which is highly conserved in mammalian. Screening of the somatic- and radiation hybrid panel assigned the gene to chromosome 3q11-12. This was confirmed by FISH analysis. However, no synteny was confirmed between the q arms of chromosomes HSA and SSC.The data presented in this work confirmed the classification of the 95 kDa sperm adhesion protein and provides new insights in its function, genomic structure and chromosomal localization. de
dc.contributor.coReferee Engel, Wolfgang Prof. Dr. Dr. de
dc.subject.topic Mathematics and Computer Science de
dc.subject.ger 500 Naturwissenschaften allgemein de
dc.subject.ger Zona pellucida bindende Proteine (ZBP) de
dc.subject.ger 95 kDa spermadhäsionsprotein de
dc.subject.ger Befruchtung de
dc.subject.ger Spermatozoen de
dc.subject.eng Zona pellucida binding proteins (ZBP) de
dc.subject.eng 95 kDa sperm adhesion protein de
dc.subject.eng Fertilisation de
dc.subject.eng Spermatozoa de
dc.subject.bk 42.13 Molekularbiologie de
dc.identifier.urn urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-185-3 de
dc.identifier.purl webdoc-185 de
dc.affiliation.institute Biologische Fakultät inkl. Psychologie de
dc.subject.gokfull WF de
dc.identifier.ppn 386082006 de

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