Exposition von Proteinen auf der Oberfläche von Escherichia coli Zellen: mechanistische Betrachtung und biotechnologische Anwendung

Wentzel, Alexander

dc.contributor.advisor	Kolmar, Harald PD Dr.	de
dc.contributor.author	Wentzel, Alexander	de
dc.date.accessioned	2012-05-16T12:12:31Z	de
dc.date.available	2013-01-30T23:50:34Z	de
dc.date.issued	2003-12-10	de
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B6CC-C	de
dc.identifier.uri	http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1402
dc.description.abstract	Evolutive Methoden der Molekularbiologie spielen bei der Entwicklung von in Hinblick auf Funktion, Stabilität oder Interaktion optimierten Biomolekülen eine wichtige Rolle. Ein zentraler Aspekt ist dabei die Bereitstellung von Proteinvarianten in mikrobiellen Produzenten und deren Durchmusterung nach der gewünschten Eigenschaft. In dieser Arbeit wurde ein Verfahren entwickelt, das es erlaubt, Proteinvarianten durch Kopplung an das Membranprotein EaeA (Intimin) enterohämorrhagischer Escherichia coli auf der Oberfläche von E. coli Zellen bereitzustellen und damit einer Funktionsabfrage direkt zugänglich zu machen. Verschiedene, sich hinsichtlich Größe, Struktur und Stabilität unterscheidende Passagierproteine (u.a. humanes Interleukin 4, Calmodulin, unterschiedliche Inhibitorproteine) wurden in Bezug auf Effizienz der Translokation durch die äußere Membran und deren Abhängigkeit vom Zusatz chemischer Agenzien (Reduktionsmittel, Detergenzien) untersucht. Aus diesen Daten wurde ein Modell für die Intimin-vermittelten Translokationen von Proteinen durch die äußere Membran von Escherichia coli Zellen abgeleitet. Die biotechnologische Anwendung der Intimin-vermittelten Präsentation von Peptid-/Proteinbibliotheken auf der bakteriellen Zelloberfläche wurde in einem experimentellen Beispiel demonstriert.	de
dc.format.mimetype	application/pdf	de
dc.language.iso	ger	de
dc.rights.uri	http://webdoc.sub.gwdg.de/diss/copyrdiss.htm	de
dc.title	Exposition von Proteinen auf der Oberfläche von Escherichia coli Zellen: mechanistische Betrachtung und biotechnologische Anwendung	de
dc.type	doctoralThesis	de
dc.title.translated	Exposition of proteins on the surface of Escherichia coli cells: mechanistic consideration and biotechnological application	de
dc.contributor.referee	Kramer, Wilfried PD Dr.	de
dc.date.examination	2003-05-07	de
dc.subject.dnb	000 Allgemeines, Wissenschaft	de
dc.description.abstracteng	Methods of molecular evolution play an important role for the optimization of biomolecules with respect to function, stability, or interaction. A key aspect is the generation of protein variants in microbial hosts and their screening for the desired characteristics. In this thesis a method for the display of peptides and proteins on the surface of Escherichia coli bacteria via linkage to the outer membrane protein EaeA (intimin) from enterohemorrhagic Escherichia coli is presented which allows for the efficient screening of large libraries for a desired property. Passenger domains of different size, molecular structure, folding stability, and function (human interleukin 4, calmodulin, different protein inhibitors) were investigated with respect to translocation competence across the bacterial outer membrane and the influence of chemical compounds (reducing agents, detergents) on their cell surface exposition. Based on these data, a model for the mechanism of protein translocation across the Escherichia coli outer membrane via intimin was deduced. Furthermore, it was shown that molecular repertoires of peptides and proteins can be stably maintained in E. coli and screened for specific interaction partners by intimin bacterial surface display and high-throughput fluorescence-activated cell-sorting (FACS) using directly or indirectly labelled target proteins.	de
dc.contributor.coReferee	Mayer, Frank Prof. Dr.	de
dc.contributor.thirdReferee	Gradmann, Dietrich Prof. Dr.	de
dc.subject.topic	Mathematics and Computer Science	de
dc.subject.ger	Intimin	de
dc.subject.ger	bakterielle Oberflächepräsentation	de
dc.subject.ger	Escherichia coli	de
dc.subject.ger	EHEC	de
dc.subject.ger	äußere Membran	de
dc.subject.ger	Sekretion	de
dc.subject.ger	Proteinexport	de
dc.subject.eng	intimin	de
dc.subject.eng	bacterial surface display	de
dc.subject.eng	Escherichia coli	de
dc.subject.eng	EHEC	de
dc.subject.eng	outer membrane	de
dc.subject.eng	secretion	de
dc.subject.eng	protein export	de
dc.subject.bk	42.13	de
dc.identifier.urn	urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-568-0	de
dc.identifier.purl	webdoc-568	de
dc.affiliation.institute	Biologische Fakultät inkl. Psychologie	de
dc.subject.gokfull	WF	de
dc.identifier.ppn	480621950	de

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Fakultät für Biologie und Psychologie (inkl. GAUSS) [1621]

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