Optimierung der molekularbiologischen Diagnostik systemischer Mykosen

Abstract

Die schnelle und effiziente Diagnostik systemischer Mykosen ist essentiell für ein effektives Therapieregime des häufig immunsupprimierten Patientenkollektivs. Hierfür bietet das Verfahren der PCR einen guten diagnostischen Ansatz. Die Schwierigkeit besteht jedoch in der möglichst sensitiven DNA-Isolation, wozu unterschiedliche Verfahren publiziert wurden. In dieser Arbeit wurden sechs unterschiedliche DNA- Aufarbeitungsprotokolle für Candida albicans, Aspergillus fumigatus und Saccharomyces cerevisiae unter in-vitro-Bedingungen bzgl. Zeitbedarf und Sensitivität mineinander verglichen. Es zeigte sich, dass die Kombination aus enzymatischer Lyse und thermischer Ruptur zwar den höchsten Zeitbedarf gegenüber der rein thermischen, rein enzymatischen bzw. rein mechanischen Verfahren bei der DNA-Isolation hat, gleichzeitig jedoch die sensitivsten Ergebnisse liefert. Anschließend ergab ein Vergleich von drei unterschiedlichen PCR-Protokollen eine deutlich verbesserte Zeiteffizienz der real-time-PCR-Technik bei gleichzeitig höherer Sensitivität gegenüber der konventionellen PCR bzw. Nested-PCR. Die Kombination aus enzymatisch-thermischer DNA-Isolation mit Anwendung der RT-PCR-Technik stellt somit die effizienteste und sensitivste Nachweismethode humanpathogener Pilzspezies dar.