Native multimer analysis of plasma and platelet von Willebrand factor compared to denaturing separation: Implication for the interpretation of satellite bands

Abstract

Die native Gelelktrophorese wurde verwendet, um die von Willebrand-Faktor (vWF) Multimere in ihrem nativen Zustand zu analysieren und eine Methode für die Anwendung bei menschlichen Plasmaproteinen zu etablieren. Der wesentliche Unterschied zwischen dem nativen Verfahren und der üblicherweise verwendeten denaturierenden Agarose-Gelelektrophorese, ist das Fehlen von Satellitenbanden im hochauflösenden nativen Gel. Um dieses Phänomen zu analysieren, wurde eine zweite Dimension unter denaturierenden Bedingungen durchgeführt. So erhielten wir ein Muster, in dem jede Proteinuntereinheit aus der ersten Dimension in drei Subbanden dissoziierte. Diese Banden bestätigen die Triplett-Struktur, welche aus einer Zwischen- und zwei Satellitenbanden besteht. Durch die Verwendung einer zweiten Dimension trennt das neuartige Verfahren die Triplett-Struktur höher auf, als es die gebräuchliche SDS-Agarosegelelektrophorese tut. Dies kann erheblich zu einer besseren Einordnung von nicht eindeutig klassifizierbaren von Willebrand Subtypen beitragen. Des Weiteren ist die native Trennmethode vorteilhaft gegenüber der konventionellen denaturierenden Multimerenanalyse, da sie es erstmals ermöglicht, die Triplett-Struktur des thrombozytären vWF aufzuzeigen. Dadurch wird es möglich, die Triplettstruktur des thrombozytären und des plasmatischen vWF miteinander zu vergleichen. Dies kann dazu beitragen herauszufinden, ob die strukturellen Anomalien des vWF-Moleküls in den Thrombozyten selbst entstehen, oder erst durch physiologische Prozesse nach Freisetzung aus den Thrombozyten in die Blutbahn. Aufgrund der guten Auflösung und Empfindlichkeit erweist sich das native Trennverfahren als geeignet für die Multimerenanalyse, welche für die Erfassung und Klassifizierung von von Willebrand Suptypen von großer Bedeutung ist.