Expression von polyspezifischen Transportern in renalen Tumoren und ihre Bedeutung für die Chemotherapie
The expression of polyspecific transporters in renal tumors and their role in chemotherapeutical treatment
by Volodymyr Shnitsar
Date of Examination:2008-04-24
Date of issue:2008-03-25
Advisor:Dr. Yohannes Hagos
Referee:Prof. Dr. Gerhard Burckhardt
Referee:Dr. Wilfried Kramer
Referee:Prof. Dr. Sigrid Hoyer-Fender
Files in this item
Name:shnitsar.pdf
Size:3.59Mb
Format:PDF
Description:Dissertation
Abstract
English
Renal cancer cell carcinoma (RCC) is usually chemoresistant. This chemoresistance would be overcome when a cytostatic is applied for which the RCC possesses an uptake transporter. In the present study I investigated the expression of solute carrier (SLC) transporters in different RCC samples and their ability to interact with chemotherapeutical drugs. I tested five RCC cancer lines as well as normal and tumor renal tissue for the expression of different SLC by RT-PCR and TaqMan real-time PCR. In two of five RCC lines, A498 and 786-O, I observed a highly significant expression of SLC22A3 (hOCT3). The uptake of the organic cation [3H]MPP (4-methyl-pyridinium iodide) into these cells and also into hOCT3 stably transfected CHO cells was inhibited by irinotecan, vincristine and melphalan. The Ki values determined from Dixon plots for irinotekan and vincristine ware 1.72+-0.45 μM, 17+-4.81 μM, and 366+-51μM, respectively. The cytotoxic activities of the selected drugs were tested by the [3H]thymidine incorporation and MTT assays on CHO-hOCT3, A498 (high expression of hOCT3) and ACHN cell lines (low expression of hOCT3). The growth of CHO-hOCT3 was inhibited by 20% more with irinotekan and by 50% more with vincristine compared to non-transfected CHO cells. Melphalan produced 20-30% more inhibition in hOCT3 expressing cells compared to non-expressing control cells. Similar results were obtained for A498 and ACHN cells. Thus, my data support the hypothesis that the sensitivity of tumor cells to chemotherapeutical treatment depends on the expression of transporter proteins mediating specific drug accumulation into the target cell.
Keywords: SLC; RCC; Irinotecan; Melphalan; Vincristine
Other Languages
Nierenzellkarzinome (RCC) sind
normalerweise Chemotherapie-resistent. Diese Chemoresistenz kann
durch Gabe von Zytostatika überwunden werden, für welches die
Karzinomazellen einen Aufnahmetransporter exprimieren. In der
vorliegenden Arbeit wurde sowohl die Expression unterschiedlicher
löslichen Carrier Transporter (SLC) in verschiedenen RCC-Proben als
auch ihre Fähigkeit, mit verschieden Chemotherapeutika zu
interagieren, untersucht. Dafür wurden fünf Nierenkarzinoma-Linien,
gesundes Gewebe und Nierentumorgewebe mittels RT-PCR und TaqMan
real-time-PCR analysiert. In zwei der untersuchten Zelllinien, A498
und 786-O, konnte eine signifikant erhöhte Expression von SLC22A3
(hOCT3) detektiert werden. Die Aufnahme des organischen Kations
[3H]MPP (4-Methylpyrididium-Iodid) in diese Zellen und in stabil
transfizierte hOCT3-exprimierende CHO-Zellen (CHO-hOCT3) wurde
durch die Agenzien Irinotekan, Vincristin und Mephalan inhibiert.
Die durch Dixon-Plots bestimmten Ki-Werte für Irinotekan und
Vincristin und Mephalan sind 1,72+-0,45 μM, 17,0+-4,81 μM und
366,0+-51,0 μM. Die zytotoxischen Aktivitäten dieser Drogen wurden
durch [3H]-Thymidin-Inkorporation und MTT-Assays in CHO-hOCT3, A498
(hohe Expression von hOCT3) und ACHN (niedrige Expression von
hOCT3) Zellen überprüft. Das Wachstum der CHO-hOCT3 Zellen wurde im
Vergleich zu nicht-transfizierten CHO Zellen durch Irinotekan um
20% und durch Vincristin um 50% inhibiert. Mephalan löste eine
20-30%ige Wachstumsinhibierung in hOCT3 transfizierten im Vergleich
zu nicht-transfizierten Zellen aus. Ähnliche Ergebnisse wurden für
A498 und ACHN Zellen erhalten. Damit unterstützen die in dieser
Arbeit erhaltenen Daten die Hypothese, wonach die Sensitivität von
Tumorzellen für Chemotherapeutika von der Expression von
Transporter-Proteinen abhängig ist, welche die spezifische
Akkumulation der Drogen in den Zielzellen vermitteln.
Schlagwörter: SLC; RCC; Irinotekan; Melphalan; Vincristin