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Das CHARGE-Syndrom – Quantifizierung eines Gonadenmosaiks und Interaktionspartnersuche des CHD7-Gens

dc.contributor.advisorEngel, Wolfgang Prof. Dr. Dr.de
dc.contributor.authorPieper, Lassede
dc.date.accessioned2013-02-04T10:08:51Zde
dc.date.available2013-02-19T23:50:06Zde
dc.date.issued2013-02-04de
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-000D-F67E-1de
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-3699
dc.description.abstractDas CHARGE-Syndrom ist ein autosomal dominant vererbtes Dysmorphiesyndrom. Meistens handelt es sich um sporadische Fälle. Nur für ca. 2/3 der Betroffenen konnte als Ursache eine Mutation im CHD7-Gen nachgewiesen werden.  In dieser Arbeit wurde eine Familie untersucht, in der zwei Kinder gesunder Eltern von einem CHARGE-Syndrom betroffen sind und die Mutation c.7302dupA heterozygot aufweisen. Die  ursächliche Mutation c.7302dupA ließ sich in den väterlichen Spermien nachweisen. Ein Gonadenmosaik konnte somit beim Vater der betroffenen Kinder bestätigt werden.  Eine Methode zur DNA-Analyse an Einzelspermien wurde etabliert, mittels derer der Grad des Mosaiks näher bestimmt werden konnte. In einer Stichprobe des untersuchten Falles trugen 16 von 59 der untersuchten Einzelspermien die Mutation c.7302dupA. Aus diesem Ergebnis lässt sich ein deutlich erhöhtes Wiederholungsrisiko bei einem weiteren Kind ableiten. Eine Interaktion von CHD7 mit CHD8 konnte durch einen direkten Yeast-Two-Hybrid nachgewiesen werden. Bestätigt wurde dieses Ergebnis durch den Nachweis der Ko-Lokalisation der beiden Proteine sowie durch ein Signal in einem bimolekularen Fluoreszenzkomplement-Assay. Im direkten Yeast-Two-Hybrid ließ sich die Interaktionsstelle im CHD7 auf den AS Bereich 1950–2172 mit den Domänen SANT und CR3 mit distalen und proximalen Überhängen eingrenzen.  Durch das Einfügen einer bei einem CHARGE-Patienten identifizierten Missense-Mutation p.Trp2091Arg in den entsprechenden CHD7-Abschnitt ließ sich keine Interaktion mit CHD8 im direkten Yeast-Two-Hybrid mehr nachweisen. Die Bedeutung dieser Missense-Mutation beim Wegfall der Interaktion zwischen CHD7 und CHD8 als Ursache für das CHARGE-Syndrom ist in diesem Fall anzunehmen.de
dc.language.isodeude
dc.publisherNiedersächsische Staats- und Universitätsbibliothek Göttingende
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/
dc.subject.ddc610de
dc.titleDas CHARGE-Syndrom – Quantifizierung eines Gonadenmosaiks und Interaktionspartnersuche des CHD7-Gensde
dc.typedoctoralThesisde
dc.title.translatedThe CHARGE syndrome - quantification of a germline mosaicism and search for interacting partners of the CHD7 genede
dc.contributor.refereeEngel, Wolfgang Prof. Dr.de
dc.date.examination2013-02-11de
dc.description.abstractengCHARGE syndrome is an autosomal dominant malformation syndrome. The majority of cases are due to de novo mutations in the CHD7 gene. In only ⅔ of the cases, a mutation in CHD7 gene could be found.  In this study a family with two affected children, both carrying the mutation c.7302dupA in a heterozgous state, is presented. The underlying mutation c.7302dupA could be identified in the sperm of the healthy father. A germline mosaicism could be demonstrated in the father of the affected children.  A method of single sperm analysis was established to determine the grade of mosaicism. In this case, the mutation was found in 16 of 59 analyzed sperms. This result leads to a high recurrence risk in further pregnancies.  An interaction between CHD7 and CHD8 could be demonstrated in direct yeast-two-hybrid. This result was confirmed by co-localisation of both proteins and by bimolecular fluorescence complementation assay. In further direct yeast-two-hybrid studies, the interacting part of CHD7 was narrowed down to the amio acid area 1950-2172 containing the domains SANT and CR3 with distal and proximal overhangs.  There are known CHARGE patients with missense mutations in CHD7 gene in the CHD7 - CHD8 interacting area. One of those missense mutations, namely p.Trp2091Arg, was inserted in CHD7 gene and this lead to a disruption of the interaction in direct yeast-two-hybrid. The missense mutation and its influence on the interaction between CHD7 and CHD8 might be responsible for CHARGE syndrome in this case.  de
dc.contributor.coRefereeBrockmann, Knut Prof. Dr.de
dc.subject.engCHD8de
dc.subject.enggermline mosaicismde
dc.subject.engCHARGE syndromede
dc.subject.engfamilial casede
dc.subject.engsingle spermatozoa PCRde
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:7-11858/00-1735-0000-000D-F67E-1-0de
dc.affiliation.instituteMedizinische Fakultätde
dc.subject.gokfullMedizin (PPN619874732)de
dc.subject.gokfullHumangenetik (PPN619875267)de
dc.description.embargoed2013-02-19de
dc.subject.freeCHD7de
dc.subject.freeCHD8de
dc.subject.freeGonadenmosaikde
dc.subject.freeCHARGE-Syndromde
dc.subject.freefamiliärer Fallde
dc.subject.freeEinzelspermien-PCRde
dc.identifier.ppn737346574de


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