dc.contributor.advisor | Legler, Tobias Prof. Dr. | |
dc.contributor.author | Rau, Anne Lone | |
dc.date.accessioned | 2017-09-29T08:13:51Z | |
dc.date.available | 2017-10-18T22:50:05Z | |
dc.date.issued | 2017-09-29 | |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0023-3F1B-D | |
dc.identifier.uri | http://dx.doi.org/10.53846/goediss-6501 | |
dc.language.iso | deu | de |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ | |
dc.subject.ddc | 610 | de |
dc.title | Inhibition des microRNA-Clusters 17-92 als mögliche Leukämietherapie | de |
dc.type | doctoralThesis | de |
dc.title.translated | Inhibition of the microRNA-cluster 17-92 as possible treatment of leukemia | de |
dc.contributor.referee | Legler, Tobias Prof. Dr. | |
dc.date.examination | 2017-10-11 | |
dc.description.abstractger | Die Dysregulation von microRNAs scheint ein entscheidender Faktor bei Leukämien zu
sein. Daher könnten Therapien möglich sein, die auf die veränderte Expression von proliferationsregulierenden
microRNAs abzielen. Das microRNA-Cluster 17-92 wurde als potentielles
Onkogen identifiziert. In der vorliegenden Arbeit wurde untersucht, ob durch
Hemmung der in diesem Cluster wichtigsten microRNA-19 eine erhöhte Apoptoserate in
Zellen ausgelöst werden kann. Hierfür wurde der microRNA-Inhibitor 19b mittels liposomaler
Transfektion in eine T-Zelllinie (Jurkat), eine B-Zelllinie (SU-DHL-4) sowie humane
mononukleäre Zellen von Blutspendern eingebracht. Durchflusszytometrisch wurden
die Transfektionsrate als Anteil der mit fluoreszenzmarkierter microRNA-Kontrolle
transfizierten Zellen sowie die Apoptoserate als Anteil der Annexin V-positiven Zellen gemessen.
Für jede Zellart wurden die Transfektionsbedingungen mit der höchsten Transfektionsrate
ermittelt. Für SU-DHL-4-Zellen konnte mit den verwendeten liposomalen
Transfektionsreagenzien keine ausreichende Transfektionsrate (maximal 12%) erzielt werden,
um den microRNA-Inhibitor 19b testen zu können. Für die Jurkat-Zelllinie konnte
mit dem Transfektionsreagenz siLentFect eine Transfektionsrate von maximal 41% erreicht
werden. Durch Transfektion mit dem microRNA-Inhibitor 19b wurde ein Anstieg
der Apoptoserate auf 34% im Vergleich zu unbehandelten (4,3%) und mit microRNAKontrolle
transfizierten Jurkat-Zellen (15%) nachgewiesen werden. Bei den mononukleären Zellen wurde ebenfalls ein Anstieg der Apoptoserate nach Transfektion mit dem
microRNA-Inhibitor 19b im Vergleich zu unbehandelten Zellen (Apoptoserate 7%) festgestellt.
Der Anstieg der Apoptoserate war jedoch bei den mit microRNA-Kontrolle
(55%) und microRNA-Inhibitor 19b (50%) transfizierten Zellen nicht signifikant verschieden. Durch Halbierung der Konzentration an microRNA-Kontrolle und microRNAInhibitor
19b konnte keine signifikante Reduzierung der Apoptoseraten erzielt werden.
Insgesamt waren die Apoptoseraten bei Transfektion von humanen primären Leukozyten
mit bis zu 55% hoch, während die Transfektionsrate nur bei maximal 17% lag. Zusätzlich
wurde untersucht, ob sich die Transfektions- und Apoptoseraten von Subtypen der
mononukleären Zellen (T-Lymphozyten, B-Lymphozyten oder Monozyten) signifikant
unterscheiden. Die Apoptoserate der Monozyten lag bereits in der unbehandelten Probe
bei 45%, und in den transfizierten Proben waren keine Monozyten nachweisbar. Bei
den B-Lymphozyten zeigten sich höhere Transfektions- und Apoptoseraten als bei den
T-Lymphozyten. Die Apoptoserate bei Transfektion mit dem microRNA-Inhibitor 19b
lag bei T- und B-Lymphozyten signifikant über der Apoptoserate bei Transfektion mit
der microRNA-Kontrolle, sodass eine Wirkung des Inhibitors auch bei Lymphozyten von
gesunden Kontrollpersonen beobachtet werden konnte.
Insgesamt konnte durch den microRNA-Inhibitor 19b eine Erhöhung der Apoptoserate
in Jurkat-Zellen nachgewiesen werden, was ein erster Hinweis auf eine Wirksamkeit
der Substanz gegen Leukämien sein könnte. Die apoptotische Wirkung des microRNAInhibitors
19b auf mononukleäre Zellen weist jedoch auf ein hohes Potential für unerw
ünschte Wirkungen hin. Vor dem Einsatz in klinischen Studien sind daher weitere
Arbeiten zur Verbesserung der Kultur- und Transfektionsbedingungen erforderlich. | de |
dc.description.abstracteng | The dysregulation of microRNAs appears to be a crucial factor in leukemia. Therefore, therapies might be possible that target the altered expression of proliferation-regulating microRNAs. The microRNA cluster 17-92 was identified as a potential oncogene. In the present study, it was investigated if an inhibition of microRNA-19, which is the most important microRNA in this cluster, can lead to an increased apoptotic rate in cells. For this purpose, the microRNA inhibitor 19b was brought into a T-cell line (Jurkat), a B-cell line (SU-DHL-4) and human mononuclear cells of blood donors by means of liposomal
transfection. Flow cytometry was used to measure both the transfection rate as a proportion of cells transfected with fluorescence-tagged microRNA control and the apoptotic rates as a proportion of the Annexin V-positive cells. The transfection conditions with the highest transfection rate were determined for each cell type. In SU-DHL-4 cells it was not possible to achieve a sufficient transfection rate (maximum 12%) for testing the microRNA inhibitor 19b when using liposomal transfection reagents. For the Jurkat cell line a transfection rate of maximum 41% could be reached when using the transfection reagent siLentFect. Transfection with the microRNA inhibitor 19b resulted in an increase of the apoptotic rate to 34% in comparison to untreated Jurkat cells (4.3%) and Jurkat cells transfected with microRNA control (15%). In the mononuclear cells, an increase in the apoptotic rate could be seen after transfection with the microRNA inhibitor 19b compared to untreated cells (apoptotic rate 7%). However, the increase in apoptotic rate did not significantly differ when comparing microRNA control (55%) and microRNA inhibitor 19b (50%) transfected cells. By halving the concentration of microRNA control and microRNA inhibitor 19b, no significant reduction of the apoptotic rate could be achieved. Overall, the apoptotic rates of transfected human primary leukocytes were high with up to 55%, whereas the transfection rate was only 17%. Additionally, it was investigated whether the transfection and apoptotic rates of subtypes of the mononuclear cells (T-lymphocytes, B-lymphocytes or monocytes) differ. The apoptosis rate of the monocytes was already 45% in the untreated sample and no monocytes were detectable in the transfected samples. The B-lymphocytes showed higher transfection and apoptotic rates than the T-lymphocytes. The apoptotic rates after transfection with the microRNA inhibitor 19b
was significantly higher than the apoptotic rate after transfection of the microRNA control in both T- and B-lymphocytes, so that an effect of the inhibitor could also be observed in lymphocytes of healthy controls. Overall, it was possible to show an increase in the apoptotic rate in Jurkat cells due to the microRNA inhibitor 19b, which could be a first sign of an efficacy of the substance against leukemia. The apoptotic effect of the microRNA inhibitor 19b on mononuclear cells however, points towards a high potential for undesirable effects. Therefore, prior to use in clinical trials, further work is needed to improve the culture and transfection conditions. | de |
dc.contributor.coReferee | Wulf, Gerald Prof. Dr. | |
dc.contributor.thirdReferee | Schön, Margarete Prof. Dr. | |
dc.subject.ger | Leukämie | de |
dc.subject.ger | microRNA-Inhibitor | de |
dc.subject.ger | microRNA 17-92 | de |
dc.subject.eng | leukemia | de |
dc.subject.eng | microRNA inhibitor | de |
dc.subject.eng | microRNA 17-92 | de |
dc.identifier.urn | urn:nbn:de:gbv:7-11858/00-1735-0000-0023-3F1B-D-4 | |
dc.affiliation.institute | Medizinische Fakultät | de |
dc.subject.gokfull | Medizin (PPN619874732) | de |
dc.description.embargoed | 2017-10-18 | |
dc.identifier.ppn | 1002330203 | |