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Der natürliche Wnt-Antagonist SFRP4 in der Wachstumsregulation von diffusen großzelligen B-Zell-Lymphomen

dc.contributor.advisorWulf, Gerald Prof. Dr.
dc.contributor.authorCicholas, Anna Karen
dc.date.accessioned2016-04-04T08:04:42Z
dc.date.available2016-05-04T22:50:06Z
dc.date.issued2016-04-04
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0028-8715-6
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-5560
dc.description.abstractDie heterogene Biologie der diffusen großzelligen B-Zell-Lymphome (DLBCL) und die daraus resultierenden Unterschiede in Therapieansprechen und Prognose stellen ein wesentliches Problem in der aktuellen Therapie von DLBCL dar. Anomalien im kanonischen Wnt-Signalweg und seinen natürlichen Antagonisten wie secreted frizzled-related proteins (SFRPs) sind für verschiedene solide und hämatologische Malignome als wichtige Bestandteile der Tumorgenese und Tumorprogression identifiziert worden. Vorarbeiten unserer Arbeitsgruppe lieferten Hinweise für die Bedeutung von Wnt3a und SFRP4 in der Regulation von DLBCL. Im Rahmen dieser Arbeit wurde untersucht, welche Rolle dem Protein SFRP4 in der Wachstumsregulation von diffusen großzelligen B-Zell-Lymphomen zukommt. Die Synthese von SFRP4 wurde in den als Modellzelllinien genutzten humanen DLBCL-Zelllinien nachgewiesen. Unter Verwendung von rekombinantem humanen SFRP4 sowie einer mittels lentiviraler shRNA erzeugten Expressionsreduktion von SFRP4 konnte gezeigt werden, dass SFRP4 zu einer Expansionshemmung sowie zu einer reduzierten Klonogenität bei DLBCL-Zellen führt. Als Ursache für diese Effekte konnte die Inhibition des kanonischen Wnt-Signalwegs durch SFRP4 identifiziert werden. SFRP4 wurde hinsichtlich seiner Bedeutung für die Ausprägung der Side Population (SP), einer Tumorzellsubpopulation mit repopulativem Potenzial, in DLBCL-Zellen untersucht. Dabei wurde sowohl durch exogene Zugabe als auch durch Reduktion von SFRP4 auf Transkriptebene die Bedeutsamkeit von SFRP4 für die SP-Regulation gezeigt. Untersuchungen zur differentiellen SFRP4-Expression sowie SFRP4-Promotormethylierung in Side Population versus non-Side Population wiesen epigenetische Mechanismen in der Regulation des SP-Phänotyps nach. Das DNA-demethylierende Medikament 5-Azacytidine reduzierte in DLBCL-Zelllinien Expansion sowie Klonogenität. Darüber hinaus beeinflusste 5-Azacytidine den kanonischen Wnt-Signalweg und den SFRP4-Gehalt der DLBCL-Zellen. Die Bedeutung von Exosomen als interzelluläre Kommunikatoren, die Wnt-Proteine transportieren, wurde unter besonderer Berücksichtigung von SFRP4 evaluiert. Sowohl SFRP4 als auch Wnt3a waren in der Exosomen- und der Mikrovesikelfraktion von DLBCL-Zellen nachweisbar. Die Exosomen waren in der Lage, den kanonischen Wnt-Signalweg an den Zielzellen zu aktivieren und Einfluss auf die Side Population zu nehmen. Insgesamt wurde für SFRP4 erstmalig eine hemmende Wirkung auf das Wachstum von DLBCL-Zellen demonstriert. Weiterführende Studien können adressieren, inwiefern die aufgezeigten Mechanismen der Wachstumsmodulation von DLBCL-Zellen durch SFRP4 in therapeutischen Anwendungen genutzt werden können.de
dc.language.isodeude
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subject.ddc610de
dc.titleDer natürliche Wnt-Antagonist SFRP4 in der Wachstumsregulation von diffusen großzelligen B-Zell-Lymphomende
dc.typedoctoralThesisde
dc.title.translatedThe role of natural Wnt antagonist SFRP4 in growth regulation of diffuse large B-cell lymphomade
dc.contributor.refereeWulf, Gerald Prof. Dr.
dc.date.examination2016-04-27
dc.description.abstractengThe heterogeneous biology of diffuse large B-cell lymphomas (DLBCL) and the resulting differences in treatment response and prognosis represent a significant problem in the current treatment of DLBCL. Anomalies in canonical Wnt signaling and its natural antagonists such as secreted frizzled-related proteins (SFRPs) are important components of tumorigenesis and tumor progression in various solid and hematological malignancies. Preliminary results of our group suggested a role of Wnt3a and SFRP4 in the regulation of DLBCL. In this study, the role of the protein SFRP4 in growth regulation of diffuse large B-cell lymphomas was investigated. The expression of SFRP4 was detected in human cell lines which are used to model DLBCL. Using recombinant human SFRP4 and cells with reduced expression of SFRP4 generated by lentiviral shRNA it could be shown that SFRP4 leads to an inhibition of expansion and reduced clonogenicity of DLBCL cells. Causative for this is the inhibition of the canonical Wnt signaling by SFRP4. Furthermore, the significance of SFRP4 for the occurrence of side population (SP), a subpopulation of tumor cells with repopulative potential in DLBCL cells, was examined. It was shown by both, exogenous addition and reduction of SFRP4 at transcripton level, that SFRP4 is important for the regulation of SP. Studies on the differential expression and promoter methylation of SFRP4 in side population versus non-side population proved the involvement of epigenetic mechanisms in the regulation of the SP phenotype. The DNA demethylating drug 5-azacytidine reduced the expansion and clonogenicity of DLBCL cell lines. In addition, 5-azacytidine influenced the canonical Wnt pathway and the amount of SFRP4 in DLBCL cells. The importance of exosomes as intercellular communicators that convey Wnt proteins was evaluated with special consideration of SFRP4. Both, SFRP4 and Wnt3a were detectable in the exosome and microvesicle fraction of DLBCL cells.The exosomes were able to activate canonical Wnt signaling at the target cells and to affect the side population. Overall, this study demonstrated for the first time an inhibitory effect of SFRP4 on the growth of DLBCL cells. However, it remains to be explored how the identified mechanisms of growth modulation of DLBCL cells by SRFP4 can be used in therapeutic applications.de
dc.contributor.coRefereeBastians, Holger Prof. Dr.
dc.subject.gerSFRP4de
dc.subject.gerDLBCLde
dc.subject.gerWnt-Signalwegde
dc.subject.gerSide Populationde
dc.subject.ger5-Azacytidinede
dc.subject.engSFRP4de
dc.subject.engDLBCLde
dc.subject.engWnt signalingde
dc.subject.engside populationde
dc.subject.eng5-azacytidinede
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:7-11858/00-1735-0000-0028-8715-6-3
dc.affiliation.instituteMedizinische Fakultätde
dc.subject.gokfullMedizin (PPN619874732)de
dc.description.embargoed2016-05-04
dc.identifier.ppn856161454


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