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Die Rolle von Gse1 in der embryonalen Hämatopoese der Maus

dc.contributor.advisorZeisberg, Elisabeth Prof. Dr.
dc.contributor.authorSchneider, Kristin
dc.date.accessioned2021-07-27T12:45:27Z
dc.date.available2021-08-12T00:50:08Z
dc.date.issued2021-07-27
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/21.11130/00-1735-0000-0008-58BF-F
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-8747
dc.identifier.urihttp://dx.doi.org/10.53846/goediss-8747
dc.language.isodeude
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
dc.subject.ddc610de
dc.titleDie Rolle von Gse1 in der embryonalen Hämatopoese der Mausde
dc.typedoctoralThesisde
dc.title.translatedThe role of Gse1 in mouse embryonic hematopoiesisde
dc.contributor.refereeZeisberg, Elisabeth Prof. Dr.
dc.date.examination2021-08-05
dc.description.abstractgerZielsetzung: Zur Erforschung einer möglichen Beteiligung des Gens KIAA0182 in der Pathogenese des Hypoplastischen Linksherzsyndroms (HLHS) wurde für vorangegangene Studien eine Knockout-Maus mithilfe der Knockout-first-Strategie für das murine Ortholog Gse1 generiert. Hierbei fiel eine fetale Letalität für den homozygot mutierten Genotyp auf, ohne dass diese vollständig durch einen kardialen Phänotyp erklärt werden konnte. Ziel der vorliegenden Arbeit ist die Überprüfung einer möglichen fetalen Anämie als alternative Ursache der beobachteten Sterblichkeit. Als Möglichkeit der zeitlichen und örtlichen Expressionsverfolgung von Gse1 sollte zudem die LacZ-Färbung für die verwendete Mauslinie etabliert werden. Methoden: Die Genotypisierung aller Embryonen erfolgte mittels PCR. Für die Blutuntersuchungen wurden Embryonen der Linie Gse1tm1d zu den Zeitpunkten E15.5 und E18.5 genutzt. Die Hämoglobinkonzentrationen wurden kolorimetrisch bestimmt. Zusätzlich wurde die Blutzellmorphologie anhand von histologischen Schnitten verglichen. Für die LacZ-Färbung wurden Embryonen der Linie Gse1tm1a zum früheren Zeitpunkt E11.5 entnommen. Ergebnisse: Auch in dieser Arbeit zeigte sich eine Letalität homozygot mutierter Embryonen. Bei diesen konnte zudem eine signifikante Reduktion der Hämoglobinkonzentration sowie eine signifikante Erhöhung des Anteils kernhaltiger Blutzellen nachgewiesen werden. Durch die Nutzung des Erythrozyten-spezifischen Antikörper TER-119 konnten diese kernhaltigen Blutzellen in der immunhistochemischen Färbung als Erythrozyten identifiziert werden. Die LacZ-Färbung konnte erfolgreich etabliert werden und zeigte zum Zeitpunkt E11.5 eine Expression von Gse1 im Bereich des Neuroepithels, wohingegen im Bereich des sich entwickelnden Herzens eine solche nicht erkennbar war. Schlussfolgerung: Eine Homozygotie für das mutierte Allel Gse1tm1d geht wie in vorangegangenen Arbeiten auch in dieser Studie mit einem intrauterinen Versterben der betroffenen Mäuse einher. Bei homozygot mutierten Embryonen der Linie Gse1tm1d zeigt sich sowohl eine Reduktion der Hämoglobinkonzentration, als auch ein erhöhter Anteil kernhaltiger Erythrozyten. In der LacZ-Färbung lässt sich bei homozygot mutierten Embryonen der Linie Gse1tm1a zumindest zum Zeitpunkt E11.5 keine Expression von Gse1 im Bereich des Herzens nachweisen. Ein kardialer Phänotyp könnte somit sekundärer Natur sein.de
dc.description.abstractengObjective: To investigate a possible involvement of the gene KIAA0182 in the pathogenesis of hypoplastic left heart syndrome (HLHS), a knockout mouse was generated for previous studies using the knockout-first strategy for the murine ortholog Gse1. This revealed fetal lethality for the homozygous mutant genotype without being fully explained by a cardiac phenotype. The aim of the present work is to verify a possible fetal anemia as an alternative cause of the observed mortality. LacZ staining should also be established as a means of temporal and local expression tracking of Gse1 for the mouse line used. Methods: Genotyping of all embryos was performed by PCR. Embryos of the Gse1tm1d line at time points E15.5 and E18.5 were used for blood analyses. Hemoglobin concentrations were determined colorimetrically. In addition, blood cell morphology was compared using histological sections. For LacZ staining, embryos of the Gse1tm1a line were collected at the earlier time point E11.5. Results: This work also showed lethality of homozygous mutant embryos. In these, a significant reduction of hemoglobin concentration as well as a significant increase of the percentage of nucleated blood cells could also be detected. By using the erythrocyte-specific antibody TER-119, these nucleated blood cells could be identified as erythrocytes in immunohistochemical staining. LacZ staining was successfully established and showed expression of Gse1 in the neuroepithelial region at time point E11.5, whereas none was evident in the developing heart region. Conclusion: Homozygosity for the mutant allele Gse1tm1d is associated with intrauterine death of affected mice, as in previous work. Homozygous mutant embryos of the Gse1tm1d line show both a reduction in hemoglobin concentration and an increased proportion of nucleated erythrocytes. In LacZ staining, no expression of Gse1 in the heart region can be detected in homozygous mutant embryos of the line Gse1tm1a, at least at time point E11.5. Thus, a cardiac phenotype could be secondary in nature.de
dc.contributor.coRefereeMänner, Jörg PD Dr.
dc.contributor.thirdRefereeMeyer, Thomas Prof. Dr.
dc.subject.gerKIAA0182de
dc.subject.gerGse1de
dc.subject.gerHypoplastisches Linksherzsyndromde
dc.subject.gerHämatopoesede
dc.subject.gerKnockout-first-Strategiede
dc.subject.gerAnämiede
dc.subject.gerLacZ-Färbungde
dc.subject.engKIAA0182de
dc.subject.engGse1de
dc.subject.enghypoplastic left heart syndromede
dc.subject.enganemiade
dc.subject.enghematopoiesisde
dc.subject.engknockout-first strategyde
dc.subject.engLacZ stainingde
dc.identifier.urnurn:nbn:de:gbv:7-21.11130/00-1735-0000-0008-58BF-F-6
dc.affiliation.instituteMedizinische Fakultätde
dc.subject.gokfullGOK-MEDIZINde
dc.description.embargoed2021-08-12
dc.identifier.ppn1764703456


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