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dc.contributor.advisor Ramadori, Giuliano Prof. Dr. Dr. h.c. de
dc.contributor.author Ramadori, Pierluigi de
dc.date.accessioned 2012-05-16T12:11:20Z de
dc.date.available 2013-01-30T23:51:06Z de
dc.date.issued 2010-08-18 de
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-B68F-5 de
dc.description.abstract Die Herkunft des zirkulierenden Erythropoietins (EPO), der beteiligten Mediatoren, sowie die Vorgänge, die zu einer Hochregulierung der EPO-Gen-Expression während einer Akute-Phase-Reaktion führen, sind noch nicht abschließend verstanden. Durch die intramuskuläre Injektion von Terpentinöl (TO) bzw. durch die intraperitoneale Injektion von LPS in Wildtyp- und in IL-6 Knockout-Mäuse, wurde eine Akute-Phase-Reaktion induziert. Die Tiere wurden jeweils zu festgelegten Zeitpunkten getötet und deren Blut, Leberzellen, sowie Muskelgewebe entnommen. Mittels ELISA wurden die Serumlevel des Erythropoietins gemessen; Gewebeproben aus der Leber sowie dem Muskelgewebe wurden zur RNA-Isolierung und zur Proteinanalyse aufgearbeitet. EPO, HIF-1alpha- und HIF-2alpha-mRNA wurden mithilfe RT-PCR analysiert, deren Proteinlevel mithilfe Western Blot und EMSA. Durch Immunfluoreszenzfärbung konnte eine Lokalisation von HIF-1alpha und HIF-2alpha erfolgen. Nachdem die Hepatozyten der Mäuse isoliert und mit IL-6 stimuliert wurden, konnten HIF-1- und HIF-2-Gene, sowie deren Proteinexpression quantitativ analysiert werden. In der Wildtyp-Population konnte 12 Stunden nach der Injektion ein dramatischer Anstieg der Serumlevel sowie der hepatischen Genexpression des Erythropoietins beobachtet werden. Die Tiere, die mit TO behandelt wurden, erreichten einen 8.2-fach höheren Anstieg der EPO-Genexpression nach 12 Stunden, Mäuse, die mit LPS behandelt wurden, zeigten eine vergleichbare Induktion der EPO-Genexpression bereits nach 6 Stunden (mit einem 4.5-fach höheren Anstieg). In der IL6KO- Züchtung fiel nach dem entzündlichen Stimulus diese Erhöhung insgesamt viel niedriger aus (nur 2.0-facher Anstieg). Ein zunehmender Anstieg von HIF-1alpha und HIF-2alpha konnte bis 6 Stunden nach der Verletzung beobachtet werden, in den IL-6KO-Mäusen kam es lediglich zu einer leichten Erhöhung von HIF-1alpha. Isolierte Hepatozyten, die durch die einmalige Applikation von IL-6 stimuliert wurden, zeigten eine Akkumulation von HIF-1alpha in den Zellkernen, parallel zu einem Anstieg von EPO mRNA. Effekte auf die Expression von HIF-2alpha blieben aus. Interleukin-6 scheint im Rahmen der Regulation der EPO-Gen-Expression die entscheidende Rolle zu spielen, ebenso nimmt es Einfluss auf die Expression von HIF-1alpha, das während der Akute-Phase-Reaktion in Hepatozyten und Kupfferzellen exprimiert wird. Der Anstieg von HIF-2alpha, das vorwiegend in Endothelzellen und Fibroblast-ähnlichen Zellen vorkommt, scheint durch das Fehlen von IL-6 nicht beeinträchtigt. de
dc.format.mimetype application/pdf de
dc.language.iso eng de
dc.rights.uri http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/ de
dc.title UPSTREAM PATHWAYS REGULATING ERYTHROPOIETIN GENE EXPRESSION IN THE LIVER DURING ACUTE PHASE RESPONSE: A CENTRAL ROLE FOR IL-6. de
dc.title.alternative ERYTHROPOIETIN GENE EXPRESSION IN TWO MURINE MODELS OF APR. de
dc.type doctoralThesis de
dc.title.translated Vorgeschaltete Stoffwechselwege regulieren die Erythropoietin-Genexpression in der Leber während der Akute-Phase-Antwort: Eine zentrale Rolle für IL-6 de
dc.contributor.referee Wienands, Jürgen Prof. Dr. de
dc.date.examination 2010-04-22 de
dc.subject.dnb 500 Naturwissenschaften allgemein de
dc.description.abstracteng The acute phase response is the systemic reaction of an organism to insults like infection, trauma, or burning and it represents the first line of defense of the body to tissue-damaging attacks.The source of circulating erythropoietin (EPO), the mediators and the mechanisms involved in the up-regulation of EPO-gene-expression during acute-phase reaction are still poorly understood. Acute phase reaction was induced either by intramuscular turpentine oil (TO) or intraperitoneal LPS injection into wild type and IL-6 knockout (KO) mice. Animals were sacrificed at different time points and blood, liver and muscle tissue were collected. Serum levels of erythropoietin were measured by ELISA; liver and injured muscle samples were processed for RNA isolation and for protein analysis. EPO, HIF-1alpha and HIF-2alpha-mRNA was analysed by RT-PCR and the protein levels by western blot and EMSA. HIF-1alpha and HIF-2alpha localization was performed through immunofluorecence staining. EPO, HIF-1 and HIF-2 gene and protein expression were also analyzed in isolated mouse hepatocytes following stimulation with IL-6. In the wild type animals erythropoietin serum levels increased dramatically at 12h after the insults together with the hepatic gene expression. In TO-treated animals the EPO-gene expression reached a peak of 8.2-fold increase at 12h and in LPS treated mice a similar induction was recorded at 6 hours (about 4.5-fold increase). In the IL6KO strain, the up-regulation after the inflammatory stimuli was much lower (only 2.0-fold increase). A progressive up-regulation of HIF-1alpha and HIF-2alpha was detectable until 6 hours after the insults, but only HIF-1alpha up-regulation was reduced in IL-6KO mice. In isolated hepatocytes, stimulation with a single dose of IL-6 induced a nuclear accumulation of HIF-1alpha, in parallel with an increase of EPO mRNA. No effect on HIF-2alpha expression was reported. These results suggest that EPO may be added to the increasing group of positive acute phase-proteins and it might represent the major source of the hormone under these conditions in murine liver. Interleukin-6 appears to be the main regulator of EPO-gene-expression and a major contributor for HIF-1alpha induction in hepatocytes and Kupffer cells during acute-phase-response. The increase of HIF-2alpha, predominantly expressed in endothelial cells and fibroblast-like cells, seems not to be affected by the lack of IL-6. de
dc.contributor.coReferee Kessel, Michael Prof. Dr. de
dc.title.alternativeTranslated Erythropoietin-Genexpression in zwei modellen der Akute-Phase Reaktion de
dc.subject.topic Mathematics and Computer Science de
dc.subject.ger erythropoietin de
dc.subject.ger leber de
dc.subject.ger Akute-Phase Reaktion de
dc.subject.ger hepatocyten de
dc.subject.ger HIF de
dc.subject.eng erythropoietin de
dc.subject.eng liver de
dc.subject.eng acute-phase reaction de
dc.subject.eng hepatocytes de
dc.subject.eng HIF de
dc.subject.bk 42.18 de
dc.identifier.urn urn:nbn:de:gbv:7-webdoc-2583-2 de
dc.identifier.purl webdoc-2583 de
dc.affiliation.institute Biologische Fakultät inkl. Psychologie de
dc.subject.gokfull WA 000: Biologie de
dc.identifier.ppn 639452167 de

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