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Transformation und Pilusbiogenese: zwei voneinander unabhängige Systeme in Acinetobacter sp. BD413

Transformation and pilus biogenesis: two independent systems in Acinetobacter sp. BD413

by Olivia Gohl
Doctoral thesis
Date of Examination:2002-11-01
Date of issue:2003-10-27
Advisor:PD Dr. Beate Averhoff
Referee:Prof. Dr. Gerhard Gottschalk
crossref-logoPersistent Address: http://dx.doi.org/10.53846/goediss-1397

 

 

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Name:gohl.pdf
Size:9.50Mb
Format:PDF
Description:Dissertation
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Abstract

English

The Gram negative soil bacterium Acinetobacter sp. BD413 is known for its high competence of natural transformation and its movement on solid surfaces. Genetic and biochemical studies of the DNA transformation apparatus indicated homologues of type IV pili subunits being involved in natural transformation of strain BD413 but not in its gliding motility. The central question arising from these findings is whether BD413 thin or thick pili are involved in DNA translocation or movement. For this investigation it was necessary to characterize the pilus structures.Genetical and physiological observations of this work demonstrate the relatedness of BD413 bundle forming thin pili to the type I family (chaperone/usher pathway). The 28 kDa subunit of the flexible thick pili show no similarity to known pilus structure proteins. Unaffected competence for natural transformation and unaffected gliding motility of pilus mutant strains indicate that thin and thick pilus structures are not involved in DNA uptake and movement on solid surfaces. Electron microscopic studies demonstrate that the thick pilus subunit structure follows the common composition of filaments in assembling a stable helical structure. The 6 nm pilus possesses a flexible height per turn of 4-10 nm that might be explain the flexibility of the filament. In contrast to this, the 16 kDa subunits of the straight 2-3 nm thin pili are assembled into a linear manner.Furthermore, our interest focuses on the DNA-uptake system that mediates free DNA to passage through the outer and inner membrane. Molecular analyses of the transformation machinery revealed that the competence factor ComP a type IV pilin-like protein is not assembled into thin or thick pili of BD413. Interestingly, after over-expression comP the bacterium synthesises another pilus structures on the cell surface.
Keywords: Acinetobacter; BD413; transformation; gliding; pili; pilus

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Das Gram-negative Bodenbakterium Acinetobacter sp. BD413 zeichnet sich durch eine hohe Kompetenz für die Aufnahme freier DNA aus und besitzt die Fähigkeit auf feuchten Oberflächen zu gleiten. Genetische und biochemische Untersuchungen zeigen eine Beteiligung von Kompetenzproteinen, die Ähnlichkeiten zu Biosynthesefaktoren von Typ-IV-Pili aufweisen, an der natürlichen Transformation; diese übernehmen aber keine essentielle Funktion bei der Fortbewegung des Bakteriums. Nach diesen Ergebnissen lautete die zentrale Frage, ob die beiden Pilustypen (dicke und dünne Pili) von Acinetobacter sp. BD413 für die DNA-Aufnahme oder die gleitende Fortbewegung essentiell sind. Während nach genetischen und physiologischen Studien dieser vorliegenden Arbeit sich die dünnen Pili zur Klasse der Typ-I-Pili zuordnen lassen, weisen die flexiblen dicken Pili keine Verwandtschaft zu bereits charakterisierten filamentösen Strukturen auf. Da sowohl die natürliche Transformation als auch die gleitende Fortbewegung bei Pilusmutanten nicht beeinträchtigt ist, sind die Pilusstrukturen von BD413 nicht an diesen beiden physiologischen Prozessen beteiligt.Elektronenmikroskopische Untersuchungen an den dicken Pili demonstrieren weiterhin einen für filamentöse Strukturen charakteristischen helikalen Anordnung der 28 kDa Untereinheiten. Die variable Steighöhe der Helix von 4 bis 10 nm begründet vermutlich die hohe Biegsamkeit dieser Struktur. Im Gegensatz dazu werden die 16 kDa Untereinheiten des dünnen Pilus in linearer Weise assembliert.Weitere Untersuchungen betreffen das DNA-Aufnahmesystem, welches den Transport der freien DNA durch die Zellhülle erlaubt. Hierbei stellte sich heraus, daß der Typ-IV-Pilin-ähnliche Kompetenzfaktor ComP keine Untereinheit der Pili von BD413 darstellt, aber das Bakterium nach Überexpression von comP einen weiteren Pilustyp synthetisiert.
Schlagwörter: Acinetobacter; BD413; Transformation; Gleiten; Pili; Pilus;
 

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