Identifizierung und funktionelle Charakterisierung neuer RNA-Transportfaktoren in der Xenopus laevis Oozyte

Abstract

Die Lokalisierung von RNA-Molekülen ist ein wichtiger Mechanismus zur Schaffung intrazellulärer Asymmetrien und spielt eine bedeutende Rolle in der Embryogenese verschiedener Organismen. Die Aufklärung dieses Prozesses, sowie die funktionelle Analyse lokalisierter RNAs können folglich zum Verständnis der frühen Embryonalentwicklung beitragen. Mit dem Ziel, neue RNA-Lokalisationsfaktoren aus der Xenopus laevis Oozyte zu isolieren, wurden transgene Frösche generiert, die eine Epitop-markierte Version des Transportfaktors Vg1RBP unter der Kontrolle eines Oozyten-spezifischen Promoters exprimieren sollten. Obwohl die transgene DNA in den Tieren nachweisbar war, wurde das rekombinante Protein nicht exprimiert. Die Proteinexpression wurde durch eine alternative Strategie erreicht und eine affinitätschromatographische Proteinaufreinigung durchgeführt. Die identifizierten Vg1RBP-Bindungspartner wurden hinsichtlich ihrer Rolle in der RNA-Lokalisierung analysiert. Dabei konnte gezeigt werden, dass die Proteine nicht nur mit Vg1RBP, sondern auch mit anderen Lokalisationsfaktoren interagieren. Außerdem konnte für eines der identifizierten Proteine eine spezifische Bindung an lokalisierte RNAs nachgewiesen werden. Im zweiten Teil der Arbeit wurden bisher nicht beschriebene vegetativ lokalisierte mRNAs funktionell durch gain-of-function und loss-of-function Experimente analysiert. In einem dritten Projekt wurden vegetativ lokalisierte RNAs hinsichtlich der Eigenschaft untersucht, in den somatischen Zellen des frühen Xenopus laevis Embryos degradiert, in den primordialen Keimzellen dagegen angereichert zu werden.