Studies on Expression and Function of Vsig1 Gene
Untersuchungen zur Expression und Funktion des Vsig1 Gens
Maiada Moustafa
Doctoral thesis
Date of Examination:
2011-02-28
Date of issue:
2011-03-11
Advisor:
Engel, Wolfgang Prof. Dr. Dr.
Referee:
Engel, Wolfgang Prof. Dr.
Referee:
Hoyer-Fender, Sigrid Prof. Dr.
Referee:
Wuttke, Wolfgang Prof. Dr.
Persistent Address: http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-0006-ADF0-0
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Name:
moustafa.pdf
Size:
4,7 MB
Format:
PDF
Description:
Dissertation
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Abstract
English
The aim of this study was to determine the expression pattern of Vsig1 during testis development and analysis of the conditional Vsig1knockout mouse, transgenic Cyto-Vsig1 and Villin-Vsig1 mouse. Expression analysis revealed that Vsig1 gene transcribes two alternatively spliced mRNA variants, namely 2.4-kb Vsig1A and 1.6-kb Vsig1B. The Vsig1A transcript is regulated by sequences locating in 5 flanking region of exon1a, while the shorter transcript Vsig1B is presumably directed by sequence locating in the 5 flanking region of exon1b. Northern blot analysis showed that Vsig1A is expressed in Sertoli cells of testis and in glandular epithelium of stomach. RT-PCR analysis revealed the expression of Vsig1A during embryonic development of testis. Expression of Vsig1B was first detectable in testis of postnatal day 20 suggesting that the expression of Vsig1B is restricted to haploid spermatids. Immunofluorescent analysis of testis sections and germ cell suspension revealed that VSIG1 is localized in the centrosome of dividing germ cells and elongated spermatids. Western blot analysis showed the presence of the shorter VSIG1B protein in the cytoplasmic fraction of testis extract. The centrosomal localization of VSIG1 was also confirmed by immunofluorescent staining of primary fibroblast, NIH 3T3 embryonic fibroblast and embryonic stem cells (ESC). The VSIG1 was colocalized with γ-tubulin, a centrosomal marker, in centrosomes of all stages of mitotic division.
Keywords: Vsig1; glandular epithelium; testis; two transcripts
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Das Ziel dieser Studie war die Bestimmung des Expressionsmusters von Vsig1 während der Hodenentwicklung und die Analyse der conditionellen Vsig1-Knockout Maus sowie der transgenen Cyto-und Vsig1 Villin-Vsig1 Maus. Expressionsanalysen zeigen, dass Vsig1 zwei alternative mRNA-Varianten transkribiert: das 2,4-kb lange Vsig1A und das 1,6-kb lange Vsig1B. Die Vsig1A Transkript wird durch Sequenzen die in der 5 'flankierenden Region des Exon1a lokalisiert sind, reguliert, während das kürzere Transkript Vsig1B durch Sequenzen reguliert wird, die in der 5 'flankierenden Region des Exon1b lokalisiert sing. Northern Blot-Analysen zeigten, dass Vsig1A in Sertoli-Zellen des Hoden und im Drüsenepithel des Magens exprimiert wird. RT-PCR-Analysen zeigten die Expression von Vsig1A während der Embryonalentwicklung der Hoden. Die Expression von Vsig1B wurde erstmals im Hoden das postnatalen Tags 20 nachweisbar und deutet darauf hin, dass die Expression von Vsig1B auf haploide Spermatiden beschränkt ist. Immunofluoreszenz Analysen von histologischen Hodenschnitten und Keimzellsuspensionen ergab, dass VSIG1 im Zentrosom sich teilender Keimzellen und länglichen Spermatiden lokalisiert ist. Western-Blot-Analysen zeigte die Anwesenheit des kürzeren VSIG1B Proteins in der cytoplasmatischen Fraktion des Hodenextrakts. Die Lokalisation von zentrosomale VSIG1 wurde ebenfalls durch Immunfluoreszenzfärbung von primären Fibroblasten, NIH 3T3 embryonaler Fibroblasten und embryonaler Stammzellen (ESC) bestätigt. Die VSIG1 wurde mit γ-Tubulin, einem zentrosomalen Marker, im Zentrosomen aller Stadien der mitotischen Teilung kolokalisiert.
Schlagwörter: Vsig1; Glanduläres Epithel; Hoden; zwei Transkripte
