Identification of microRNA 302 as an antagonist to p63 expression

Abstract

Die p53-Familie von Transkriptionsfaktoren ist essentiell in der Tumorsuppression, während der Entwicklung und in der Gewebehomöostase. MicroRNAs sind kleine, einzelsträngige RNAs, die an der Translationskontrolle und der mRNA-Stabilität beteiligt sind. Zur Untersuchung, ob microRNAs an der Regulation von p63 und p53 beteiligt sind, wurde eine immunofluoreszenzbasierte Serienuntersuchung durchgeführt. '5637' Urothel-Karzinomzellen wurden mit einer Sammlung von microRNA-Expressionsplasmiden transfiziert und zelluläres p63 und p53 wurden durch halbautomatische Immunofluoreszenz quantifiziert. MicroRNAs des 302 Clusters (miR-302) unterdrückten die p63 Proteinmengen deutlich in dieser Serienuntersuchung und in allen im folgenden getesteten Zell-Linien. Mir-302 Expression reduziert p63 Protein- und mRNA-Mengen durch direkte Interaktion mit zwei Bindungsstellen in der 3' untranslatierten Region von p63-α und β mRNAs. In testikulären Karzinomzellen trägt endogen exprimierte miR-302 zur Suppression von p63 bei. Physiologisch könnte miR-302 zur Eliminierung von p63 während der Maturation von Oozyten beitragen. MiR-485 wurde als vermutlicher Regulator von p53 identifiziert. In '5637'-Zellen reduziert miR-485 Expression die Proteinmenge von mutiertem p53; Expression in 'U2OS'-Osteosarkomzellen reduziert wildtypisches p53, inhibiert p21-Induktion nach genotoxischem Stress und verursacht erhöhte Mengen an γ-phosphoryliertem H2A.X Histonproteinen. Diese Interaktion scheint indirekt zu sein und ist zelltypspezifisch. Sie könnte eine Funktion in Neuronen während gesteigerter neuronaler Aktivität haben. Die etablierte Serienuntersuchungstechnik könnte verwendet werden, um regulatorische microRNAs für jedes Protein zu identifizieren, das sich durch Immunofluoreszenz darstellen läßt. Wie durch miR-302 und -485 demonstriert wird, können sowohl direkte als auch indirekte Regulatoren gefunden werden. Außerdem könnten die Effekte anderer Regulatoren wie z.B. Kinasen auf ein spezifisches Protein untersucht werden.