14-3-3-Isoformen im Liquor cerebrospinalis bei Patienten mit verschiedenen molekularen Subtypen der sporadischen Creutzfeldt-Jakob-Krankheit

Abstract

Die sporadische Creutzfeldt-Jakob-Krankheit gehört mit einer Inzidenz von 1-2/1 Millionen Einwohner zu den seltenen Transmissiblen Spongiformen Enzephalopathien, die, durch Prionen hervorgerufen, zu einer spongiformen Degeneration des Gehirns und konsekutiv immer zum Tode führen. Neben typischen Symptomkonstellationen, MRT- und EEG-Mustern ist der Nachweis des Proteins 14-3-3 im Liquor von Patienten mit sporadischer Creutzfeldt-Jakob-Krankheit in die prämortalen Diagnosekriterien der WHO eingegangen. In der hier vorliegenden Arbeit sollte untersucht werden, welche der sieben beim Menschen vorkommenden 14-3-3-Isoformen im Liquor der Patienten nachzuweisen sind und ob sie in einem bestimmten Muster bei den sechs verschiedenen Subtypen der sporadischen Creutzfeldt-Jakob-Krankheit (MM1, MM2, MV1, MV2, VV1, VV2) vorliegen. Variierende Krankheitsverläufe und v. a. Krankheitszeiten waren Motivation zu vorliegender Fragestellung und möglicher diagnostischer Differenzierung der Subtypen. Es wurden jeweils sieben bzw. vier Patienten jedes Subtyps, sowie acht Kontrollpatienten mit ischämischen bzw. entzündlichen Erkrankungen des Gehirns, mittels SDS-PAGE und Western Blot auf das Vorhandensein der sieben 14-3-3-Isoformen im Liquor untersucht. Die ausgewählten Patienten stammten aus dem Nationalen Referenzzentrum für die Surveillance Transmissibler Spongiformer Enzephalopathien Göttingen. Der Liquor wurde jeweils im letzten Drittel der gesamten Krankheitsdauer entnommen und die Diagnose postmortal histopathologisch gesichert. Die verwendeten Primärantikörper stammten von der Firma IBL (Japan) und zeigten eine hohe Spezifität für die einzelnen 14-3-3-Isoformen. Die aus den Western Blots erhaltenen Ergebnisse wurden semiquantitativ nach ihren Bandenintensitäten. Außerdem wurde der Zusammenhang eines weiteren neurodegenerativen Markers, dem Tau-Protein, zu den im Liquor cerebrospinalis nachgewiesenen 14-3-3-Isoformen untersucht. In dieser Arbeit konnte gezeigt werden, dass bei allen sCJK-Subtypen vier der sieben Isoformen (14-3-3-β, -γ, -ζ, -ε) im Liquor nachweisbar sind, zwei Isoformen (ηund σ) gar nicht gefunden wurden und 14-3-3-τvereinzelt bei einigen sCJK-Subtypen vorkam. Es konnten Tendenzen von subtypen-spezifischen Isoformmustern gesehen werden, die sich vor allem im Vorhandensein oder Fehlen von 14-3-3-τ und den Isoformkonzentrationen widerspiegeln. Wir konnten zeigen, dass ausgeprägte Neurodegeneration mit stärkeren Bandenintensitäten der verschiedenen 14-3-3-Isoformen beim Western Blot einhergeht. Wir konnten im Einklang mit diesem Ergebnis auch eine Korrelation zwischen der Höhe des Tau-Proteins und der Bandenstärken von 14-3-3-Isoformen feststellen. Es konnte außerdem gezeigt werden, dass insbesondere der Nachweis der 14-3-3-β-Isoform für die Diagnose der sporadischen Creutzfeldt-Jakob-Krankheit spricht und möglicherweise zur Differenzierung bei falsch-positivem 14-3-3-Nachweis dienen könnte, da diese Isoform überraschenderweise im 14-3-3-positiven Kontrollkollektiv nahezu nicht nachweisbar war. Für eine valide subtypen-spezifische Diagnose der sCJK bedarf es noch weiterer Forschung.