Reverse-Transkription-Polymerasekettenreaktion (RT-PCR) zum Nachweis von Parathormon-ähnlichem Protein (PTHrP) sowie Immunzytologie von Zytokeratin 18 (CK 18) zur Detektion disseminierter Tumorzellen im peripheren Blut und Knochenmark von Patientinnen mit Mammakarzinom

Abstract

In der vorliegenden Arbeit wurde der Nachweis disseminierter Tumorzellen im peripheren Blut und Knochenmark von Mammakarzinompatientinnen immunzytochemisch unter Verwendung monoklonaler Antikörper gegen Zytokeratin 18 sowie mittels einer nested RT-PCR zum Nachweis von PTHrP-Transkripten untersucht. Im Knochenmark und peripheren Blut einer Kontrollgruppe von 8 Patientinnen mit einer benignen Erkrankung der Mamma wurden in 2 von 8 KM-Proben und in keiner der PB-Proben CK-18-positive Zellen nachgewiesen. Die positiven KM-Proben stammten von Patientinnen mit einer Mastopathie, adenoiden oder papillomatösen Veränderungen der Brustdrüse. Für den Nachweis von PTHrP mittels der RT-PCR stellten sich 7 KM- und PB-Proben negativ dar. Innerhalb eines mittleren Beobachtungszeitraums von 30 Monaten ergab sich für diese Patientinnen kein Hinweis auf die Entwicklung eines epithelialen Tumors. Proben von 46 Mammakarzinompatientinnen wurden untersucht, von denen 41 ein primäres Mammakarzinom und 5 ein Rezidiv ihrer Erkrankung zum Zeitpunkt der Probenentnahme aufwiesen. Der mediane Beobachtungszeitraum nach Analyse betrug 20 Monate. Mit der APAAP-Färbung konnte ein positiver Nachweis von CK 18 in 9 von 37 KM und 4 von 37 PB in Zytozentrifugationspräparaten, bzw. in 5 von 14 KM und 5 von 13 PB in Sedimentationspräparaten geführt werden. In der nested RT-PCR wiesen 10 von 34 Patientinnen im KM und 9 von 35 Patientinnen im PB sowie alle 12 Tumorgewebe ein positives Ergebnis für PTHrP auf. Eine Korrelation mit den etablierten Prognosefaktoren der TNM-Klassifikation sowie dem Östrogen- und Progesteronstatus wurde nicht festgestellt. Positive Nachweise mit allen drei Methoden lagen vornehmlich bei Patientinnen mit niedrigeren Tumorstadien vor, wobei die Ergebnisse nur partiell konkordant waren. Für keine der untersuchten Methoden war eine Assoziation mit einem verkürzten rezidivfreien Intervall oder einem verkürzten Überleben der Patientinnen festzustellen. Die Bedeutung der Nachweise CK-18-positiver Zellen in den Proben von Patientinnen mit einer benignen Erkrankung der Mamma und insbesondere die Bedeutung der relativ hohen Nachweisraten disseminierter Tumorzellen der nodal negativen Mammakarzinompatientinnen mit kleinen Tumoren bedarf weiterer Abklärung.